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目的:脑外伤发生后,炎性因子大量增加,导致继发性颅脑损伤早已经被认识,因此控制炎症反应成为治疗脑外伤的方法之一。孕酮可以调节NF-κB和TLR9等多种炎症反应的调控元件,而这些都与调节性T细胞功能作用相关。因此,探索孕酮治疗脑外伤对调节性T细胞(Treg)的功能影响将为优化孕酮治疗脑外伤提供理论依据。方法:使用电控脑挫伤打击仪创建中度脑外伤模型。试验动物选择C57雄性小鼠。将小鼠随机分成假手术组(sham)、孕酮治疗组和生理盐水安慰剂对照组。假手术组只钻孔,不做任何处理。孕酮治疗组于伤后1小时,予孕酮腹腔注射,16mg/Kg,对照组予相同剂量生理盐水腹腔注射,每天一次,连续给予5天。分别在创伤后1,3,5,7天杀鼠,取脾备用。应用流式细胞术测定小鼠脑创伤后脾脏中的调节性T细胞(Treg)。取创伤脑组织,提取蛋白,应用western blotting技术测定孕酮治疗后小鼠脑组织中TNF-α、IL-1β、NF-κB和Occludin的变化情况。取对侧脑组织,应用干湿重法测定大脑组织含水量,评价脑组织水肿变化情况。取完整脑组织,行石蜡及冰冻切片,分别应用免疫组化和免疫荧光法观察孕酮治疗后小鼠脑组织中的中性粒(MPO)、CD3+细胞、小胶质细胞和星形胶质细胞变化情况。伤后1,3,7天使用改良神经损伤评分法(Modified Neurological Severity Scores,mNSS)持续分别对三组小鼠进行评分,评判孕酮对小鼠的行为学功能的影响。使用SPSS 19.0软件进行统计学分析。结果:流式细胞术显示对照组脾脏中Treg细胞比例较sham组少,孕酮治疗组脾脏中Treg细胞比例较对照组多,但较sham组少,P<0.05,差异具有统计学意义。Western blotting结果显示,TNF-α、IL-1β、NF-κB等促炎因子在对照组中表达较孕酮治疗组多,孕酮治疗组较sham组略多;IL-10和Occludin对照组中表达较孕酮治疗组少,孕酮治疗组较sham组略少。应用干湿重法测定小鼠脑组织含水量显示,对照组较假手术组明显增高,孕酮治疗组较对照组减少,有统计学意义(P<0.05)。mNSS评分显示,对照组较假手术组明显增高,孕酮治疗组较对照组降低,有统计学意义(P<0.05)。免疫组化染色结果显示对照组较孕酮治疗组CD3+、小胶质细胞、中性粒细胞及星形胶质细胞多,P<0.05,有统计学意义。免疫荧光染色显示脑组织ZO-1、Occludin及Foxp3等细胞,孕酮治疗组较安慰剂对照组多,差异具有统计学意义(P<0.05)。水迷宫结果显示孕酮治疗组逃离潜伏期较安慰剂对照组短,差异有统计学意义(P<0.05),假手术组较孕酮治疗组,逃离潜伏期无差异(P>0.05)。结论:从以上结果中可以看出,脑外伤后脾脏中Treg细胞比例减少,而孕酮治疗后,脾脏中Treg细胞比例增多,证明孕酮对于Treg细胞存在调控作用,可促进脑外伤后Treg细胞增殖;外伤会引起大量炎症因子在脑组织聚集,促炎因子增多,而抑炎因子减少,导致严重炎症反应。孕酮具有抑制促炎因子聚集,促进抑炎因子聚集,减轻炎症反应,减少脑水肿、改善行为学表现及空间记忆能力等作用。同时孕酮可以促进Occludin等紧密连接蛋白的聚集保护血脑屏障免受脑外伤及其继发性颅脑损伤的破坏。同时可推测得出,孕酮抑制炎症反应,保护血脑屏障,减轻脑水肿可能是通过调节Treg细胞实现的。