【摘 要】
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研究背景:2020 Global Cancer Statistics报道,癌症病例中肺癌的发病率在全世界居第二位,死亡率居第一位。NCCN（National Comprehensive Cancer Network,美国国立综合癌症网）2021版非小细胞肺癌及小细胞肺癌临床实践指南指出,顺铂（cisplatin,DDP）或以顺铂为主的新辅助化疗是晚期肺癌患者的首选治疗方案。但随着化疗药物的长期应用
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研究背景:2020 Global Cancer Statistics报道,癌症病例中肺癌的发病率在全世界居第二位,死亡率居第一位。NCCN（National Comprehensive Cancer Network,美国国立综合癌症网）2021版非小细胞肺癌及小细胞肺癌临床实践指南指出,顺铂（cisplatin,DDP）或以顺铂为主的新辅助化疗是晚期肺癌患者的首选治疗方案。但随着化疗药物的长期应用,顺铂耐药问题日益严重,因此寻找联合用药逆转耐药对提高肺癌患者的临床疗效具有重要的科学意义。目的:在细胞实验水平上,探索天花粉蛋白（Trichosanthin,TCS）与顺铂联合应用对顺铂耐药人肺癌A459细胞增殖、迁移、周期和凋亡的影响。研究TCS对肺癌A549/DDP细胞的耐药逆转作用,并初步探讨其作用机制。方法:（1）MTT法检测不同浓度DDP和TCS单药以及联合用药对肺癌A549/DDP细胞增殖的影响并确定半数抑制药物浓度(IC50);（2）用Compu Syn软件分析得出DDP和TCS联合用药的联合用药指数（combination index,CI值）;（3）结晶紫染色后在光学显微镜观察A549/DDP细胞药物处理后细胞密度的变化;（4）细胞划痕实验检测A549/DDP细胞药物处理后的迁移情况;（5）流式细胞术检测A549/DDP细胞药物处理后的凋亡和各细胞周期的比例;（6）免疫印迹实验检测A549/DDP细胞药物处理后增殖、迁移、细胞凋亡及耐药相关蛋白表达水平。结果:（1）TCS和DDP单药均能抑制人肺癌A549/DDP细胞的增殖,与顺铂单药组相比,联合TCS后,同一浓度的顺铂对A549/DDP细胞增殖抑制作用更强。DDP单药处理A549/DDP细胞48h的IC50值为24.27±5.52μg/ml,DDP与TCS两药联合作用A549/DDP细胞后DDP的IC50值下降为5.43±0.98μg/ml;（2）DDP联合TCS作用于A549/DDP细胞48h的CI值均小于0.7,表明二者联用具有协同作用;（3）结晶紫染色下观察到联合用药组的细胞密度明显少于其他组;（4）细胞划痕实验显示联合用药能明显抑制A549/DDP细胞迁移;（5）流式细胞术结果发现联合用药升高A549/DDP细胞的凋亡比例,阻滞细胞周期于G2/M期;（6）免疫印迹实验表明联合用药上调BAX、PARP蛋白表达,下调Bcl-2、ERCC1、P-gp、LRP、p-Akt、p-ERK、Vimentin、MMP-9蛋白表达。结论:DDP和TCS联合用药对A549/DDP的增殖和迁移具有协同抑制作用,与抑制增殖通路相关蛋白、迁移相关蛋白表达有关;TCS能逆转A549/DDP细胞对DDP的抗性,与抑制耐药蛋白表达、促进细胞凋亡、诱导细胞周期G2/M期阻滞有关;表明天花粉蛋白对顺铂耐药具有逆转作用,可为临床解决肺癌顺铂耐药问题提供实验支撑和理论基础。
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