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威灵仙Radix et Rhizoma Clematidis为临床常用的祛风湿止痛药,《中国药典》以毛莨科植物威灵仙Clematis chinesis Osbeck、棉团铁线莲Clemtis hexapetala Pall.及东北铁线莲Clematis mandshurica Rupr.的干燥根及根茎入药。但我国作为中药威灵仙流通及使用的品种远比此复杂,不同地区除药典品种外,还有其他品种作威灵仙用。这些来源于不同品种的威灵仙类药材是否与药典收载的威灵仙品种具有相同的质量,能否替代资源逐渐匮乏的药典品种,都是一个值得探讨的问题。贵州为南方中药材的主要产区之一,由于特殊地理环境和气候,药用资源十分丰富,威灵仙类药材品种较为复杂。为弄清黔产威灵仙类药材品种状况及其地区来源,并对这些品种进行系统鉴别及质量评价,本文进行了以下方面的研究:
1.通过对贵州各地州市的药材市场进行商品威灵仙药材的实地调查、收集、鉴定,整理出了现今贵州市场常见的威灵仙商品药材的品种情况,结果表明:黔产作商品流通的威灵仙有毛莨科植物柱果铁线莲Clematis uncinata Champ.、山木通C.finetiana Lévl.etVant.、扬子铁线莲C.ganpiniana(Lévl.et Vant.)Tamura和显脉旋复花Inula nervosa Wall.干燥的根及根茎以及草珊瑚Sarcandra glabra(Thunb.)Nakai干燥的根及根茎或全草,共5种,其中柱果铁线莲为主流品种。
2.采用薄层色谱、紫外光谱组的鉴别技术,对收集到的样品进行系统的鉴定研究。研究结果显示,在本文采用的四种不同极性的展开系统下,正品威灵仙与黔产威灵仙类药材均能得到较好的薄层鉴别效果。分别对氯仿、无水乙醇、水三种溶剂的威灵仙类药材浸出液进行紫外光谱扫描,发现威灵仙类药材的紫外谱线组图像、最大吸收峰数目及峰位值均具有较大差异,具有明显的鉴别特征,能够达到鉴别该类药材的目的。
3.首次建立了威灵仙类药材的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱鉴别方法。采用RP—HPLC法,以DiamonsilC18(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱为分析柱,以乙腈—0.05%磷酸水系统为流动相,采用梯度洗脱,在210nm波长下,以0.8mL/min的流速对不同来源的药材进行检测,建立了柱果铁线莲药材HPLC—UV指纹图谱共有模式,并对威灵仙类药材进行相似度评价,结果具有明显差异。
4.分别采用分光光度法和高效液相色谱法比较了威灵仙类药材中的总皂苷和齐墩果酸含量。结果贵州不同地区收集到的威灵仙类药材中总皂苷和齐墩果酸含量有明显的差异,其中以柱果铁线莲中两者的含量最高,而山木通、显脉旋复花中均未检出齐墩果酸,混淆品安徽威灵仙中未检测到总皂苷,草珊瑚中均检测不到齐墩果酸和总皂苷。
5.首次对柱果铁线莲和山木通中挥发性成分进行GC—MS分析,结果分别鉴定出51个和46个化学成分,与文献报道的威灵仙挥发性成分对比,威灵仙与柱果铁线莲中均含有棕榈酸、亚油酸、亚油酸甲酯和棕榈酸甲酯;山木通和威灵仙都含有棕榈酸、亚油酸和己酸,实验数据表明威灵仙和柱果铁线莲挥发油的的主要成分具有较大的相似性。
6.对黔产主要品种柱果铁线莲和山木通,与正品威灵仙药材进行浸出物和多糖的含量比较,结果表明,山木通多糖含量较高,柱果铁线莲的乙醇浸出物较高。并对他们进行了镇痛抗炎的药效学对比研究,采用小鼠扭体实验、耳肿胀实验、足肿胀实验及棉球肉芽肿药理实验方法,结果表明,在抗炎镇痛方面,三者的药效没有明显的差异,在同样有效剂量下,山木通在镇痛方面,柱果铁线莲在抗炎性肿胀方面明显优于正品威灵仙。
7.采用RP—HPLC法对威灵仙和柱果铁线莲体内外的高效液相色谱(HPLC)图谱进行比较,研究结果表明,威灵仙与柱果铁线莲药材HPLC指纹图谱有10个共有峰,威灵仙含药血浆与柱果铁线莲含药血浆HPLC指纹图谱有5个共有峰,为阐明具有相同功效的铁线莲属植物可能具有相同的药效物质基础提供参考,也为柱果铁线莲能否作威灵仙用提供实验依据。