【摘 要】
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LPTS(a novel liver-related putative tumor suppressor)是本实验室利用差异表达的EST信息克隆的一个新的候选肿瘤抑制基因,定位于人染色体8p23区,该区域是肝癌发生染色体杂合性
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LPTS(a novel liver-related putative tumor suppressor)是本实验室利用差异表达的EST信息克隆的一个新的候选肿瘤抑制基因,定位于人染色体8p23区,该区域是肝癌发生染色体杂合性缺失(LOH)的高频区。LPTS的功能研究表明可以抑制肿瘤细胞的增殖,并具有端粒酶抑制活性。我们制备了LPTS的多克隆抗体,通过亲和层析对获得的抗血清进行了纯化,Western Blotting和免疫荧光分析显示:该纯化抗体能特异识别SMMC-7721细胞内源性表达的LPTS蛋白和外源性的HA-LPTS蛋白。上述结果表明我们获得了一特异性强、活性高的LPTS的多克隆抗体,可用于进一步对LPTS的功能研究。 LPTS binding-protein 2(LBP2)是我们实验室利用酵母双杂交筛选人脑cDNA文库分离出的一个LPTS的结合蛋白。为了深入研究LBP2的功能,我们克隆了LBP2基因,分别成功构建了LBP2的原核与真核表达质粒,纯化得到了6×His-LBP2、6×His-LBP2C689、GST—LBP2N712融合蛋白。用6×His-LBP2融合蛋白为抗原免疫家兔,获得了LBP2多克隆抗体。 免疫共沉淀和GST-Pulldown实验结果表明,LBP2在体外与体内均与LPTS蛋白相结合,进一步验证了酵母双杂交结果。利用荧光标记技术及免疫荧光检测表明:LBP2与LPTS在细胞内共定位,分布于核仁与端粒上。LBP2及其N端在体外可以抑制端粒酶活性(TRAP法分析),而其C端没有抑制活性。LBP2与端粒酶催化亚基hTERT在体内相互作用。 我们的实验结果表明LBP2是一个LPTS结合蛋白,在体外能抑制端粒酶活性,很可能参与端粒长度的调控。
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