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山茱萸是山茱萸科(Comaceae)山茱萸(Cornus officinalis Sieb.et Zucc.)除去果核的干燥成熟果肉,主产于河南、浙江和陕西省,是我国常用传统中药。现代药理研究证明山茱萸具有较好的调节免疫系统功能和显著的降血糖作用,具有广阔的市场前景。本课题主要通过UV法和HPLC法测定不同采收期、不同加工方法、不同储藏方法山茱萸药材中有效成分含量,并结合HPLC指纹图谱研究以期建立山茱萸药材质量的综合评价方法,为山茱萸规范化种植和药材可持续发展提供依据。
第一部分是山茱萸采收、加工、储藏共性技术研究。
一、山茱萸一年内果实最佳采收期的确定。对不同采收时期和不同产地的山茱萸果实进行跟踪测定,以其中化学成分马钱苷、熊果酸、多糖、鞣质、水溶性浸出物的含量和醇溶性浸出物的含量为主要参考指标,确定不同产区山茱萸最佳采收期。其中陕西佛坪山茱萸最适采收期为9月下旬至10月上旬;河南西峡山茱萸最适采收期为10月中旬至10月下旬;浙江临安山茱萸最适采收期为10月中旬至10月下旬。
二、建立山茱萸药材初加工的方法和技术。对山茱萸产地加工方法和技术进行系统的研究,以其中化学成分马钱苷、熊果酸、多糖、鞣质、水溶性浸出物的含量、醇溶性浸出物的含量以及药材相对产量为主要参考指标,确定其产地初加工方法为:采收→清洗→水煮软化→机械去核→烘箱干燥。
三、初步确定山茱萸药材的最佳储藏条件和保存期。通过对比分析山茱萸药材在室温条件、冷藏条件以及控湿控温条件下化学成分的变化规律,以其中化学成分马钱苷、熊果酸、多糖、鞣质、水溶性浸出物的含量、醇溶性浸出物的含量以及色素和外观颜色变化主要参考指标,初步确定山茱萸最佳储藏条件为冷藏,温度:-2℃~10℃,湿度:45%~65%。
第二部分是山茱萸药材HPLC指纹图谱研究。
方法:采用C18ODS柱、DAD检测器,以甲醇回流提取制备样品溶液,采用HPLC法在A(乙腈)-B(0.01%磷酸)二元梯度洗脱系统:5%-7%A(O-8min),7%-15%A(8-20min),15%-20%A(20-40min),20%-25%A(40-50min):流速:1.0ml/min;柱温:25℃;检测波长:240nm的条件下测定山茱萸的指纹图谱。方法学考察表明试验精密度RSD%<3%;方法重现性RSD<3%:样品在24h内稳定。通过测定22批山茱萸样品的指纹图谱,确定了10个共有峰,以马钱苷和莫诺苷为参照峰,计算22批共有峰的相对峰面积和相对保留时间。结果表明:所得的HPLC指纹图谱相似度均在90%以上,指纹图谱控制的物质群在药材中得以体现。