【摘 要】
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家蚕丝腺生物反应器是利用家蚕丝腺体能高产优质的合成分泌丝蛋白特性而被广泛用于表达外源蛋白。人成纤维细胞生长因子（fibroblast growth factor）对人体细胞组织再生和创伤愈合具有十分重要的调控作用。本研究致力于利用PiggyBac转座子将人碱性成纤维细胞生长因子（human basic fibroblast growth factor,hbFGF）基因导入家蚕基因组以获得具有生物学
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家蚕丝腺生物反应器是利用家蚕丝腺体能高产优质的合成分泌丝蛋白特性而被广泛用于表达外源蛋白。人成纤维细胞生长因子（fibroblast growth factor）对人体细胞组织再生和创伤愈合具有十分重要的调控作用。本研究致力于利用PiggyBac转座子将人碱性成纤维细胞生长因子（human basic fibroblast growth factor,hbFGF）基因导入家蚕基因组以获得具有生物学活性的重组人碱性成纤维细胞生长因子蚕丝。本实验构建了 PiggyBac转座供体质粒pB-hbFGF,该质粒两个表达框分别由重链启动子启动hbFGF在家蚕后部丝腺表达,IE1启动子启动绿色荧光蛋白基因（报告基因）在家蚕全身表达以便于荧光显微镜下筛选转基因阳性蚕。pB-hbFGF转座质粒和辅助质粒（转座酶）经显微注射导入家蚕蚕卵,待孵化饲养至G1代蚁蚕后经绿色荧光筛选获得转基因阳性蚕,获得表达了人碱性成纤维细胞生长因子的蚕丝。PCR验证证实了人碱性成纤维细胞生长因子基因已导入了家蚕基因组,荧光定量检测得知转基因家蚕品系的hbFGF基因得到了极显著表达;采用蚕丝为材料经western blot检测,证明转基因家蚕品系hbFGF蚕丝中含有34kD目的蛋白条带。经蚕丝机械性能分析后得知hbFGF品系蚕丝机械强度优于非转基因型Lan10品系。由此可知,本实验已经获得具有可稳定遗传hbFGF的转基因家蚕,其蚕丝中含有的hbFGF蛋白有可能促进细胞组织再生和创伤愈合。此外,因转基因品系蚕丝机械性能提高,所以研究成果为制造可能用于外科手术无需拆除的、可促进伤口愈合的手术缝合线奠定基础。
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