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炎症反应是由免疫系统分泌的致炎因子介导的针对有害刺激产生的一种自然性防御反应,然而异常的炎症反应比如反应过度或针对自身正常组织产生反应却可造成机体组织的损伤,导致多种疾病,如急、慢性炎症性疾病及自身免疫性疾病等;因此控制炎症反应对于治疗以上炎症相关疾病具有重要意义。白细胞介素6(interleukin 6,IL-6)是一个重要的炎症介导因子。在前期研究中,我们构建了以荧光素酶报告基因为基础的IL-6表达调节剂筛选系统,以筛选可能抑制炎症反应的化合物。利用该筛选系统,从300多种天然中药化合物中筛选得到TI110,发现TI110可以明显抑制IL-6启动子调节下的报告基因的表达。本论文即在此基础上,针对TI110作为抗炎候选化合物开展了深入研究。为了研究TI110对炎症反应的抑制作用,我们在体外利用了LPS刺激的巨噬细胞炎症反应模型。首先,通过MTT分析发现实验剂量的TI110对巨噬细胞的细胞活力没有显著影响。然后通过RT-PCR,RT-qPCR及ELISA检测发现TI110在RAW 264.7细胞,小鼠腹腔巨噬细胞和人单核巨噬细胞THP1等三种来源的巨噬细胞中都可以显著地抑制炎症细胞因子IL-6,TNF-α,IL-1β的mRNA水平和蛋白水平的表达。同时,我们发现TI110在LPS刺激的巨噬细胞中促进抗炎细胞因子IL-10和TGF-β1 mRNA水平的表达,增加抗炎因子的释放。然后,我们进一步研究了TI110对炎症介质产生的影响,发现TI110能明显抑制巨噬细胞中LPS刺激下iNOS的表达和NO的释放,抑制COX2蛋白的表达和晚期炎症因子HMGB1的分泌。接下来,我们研究了TI110在巨噬细胞中发挥抗炎作用的机制。在LPS刺激的巨噬细胞中,TI110能够抑制NF-κB磷酸化和p65的入核,提示TI110能够抑制LPS介导的NF-κB信号通路活化。此外,TI110在LPS刺激的巨噬细胞中显著抑制IRF5的表达。对于介导炎症反应的MAPK信号通路,TI110对p38/MAPK,ERK/MAPK的信号通路没有显著的影响,只对JNK信号通路有抑制作用。我们进一步研究还发现TI110能够促进LPS刺激的巨噬细胞AMPK磷酸化激活AMPK。我们利用AMPK抑制剂Compound C抑制AMPK的激活,则消除了TI110对NF-κB和IRF5的抑制作用,这提示了TI110对NF-κB和IRF5信号通路的抑制作用是通过激活AMPK而实现的。上述结果表明TI110可通过多种分子机制发挥其抗炎作用。最后,我们构建了LPS诱导的小鼠体内炎症模型,发现腹腔注射TI110增加感染性休克小鼠的存活率,降低其血清中IL-6,TNF-α,IL-1β等炎症细胞因子的含量,降低NO和HMGB1炎症介质的释放,增加抗炎因子IL-10的分泌且减轻模型组小鼠的肝损伤。综上所述,我们利用体外和体内实验证明TI110可显著抑制LPS引起的炎症反应,且TI110的抗炎作用是通过调节多种炎症相关信号通路来实现的。因此,天然化合物TI110可能会成为治疗炎症相关疾病的潜在药物。