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目的:本实验通过Wistar大鼠建立EAE模型;观察滋阴固本方对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠行为学、体重、神经功能的评分,大鼠神经组织病理学变化及测定MBP其中的表达,探讨本方对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠大脑组织的作用机制,为滋阴固本方对EAE及多发性硬化的临床应用提供新的实验理论依据。 方法:1.采用新鲜豚鼠脊髓匀浆再加完全弗氏佐剂,给予EAE组大鼠四肢足垫皮下分别注射诱导乳剂豚鼠脊髓匀浆+完全福氏佐剂(GPSC+CFA)0.1ml,作为免疫抗原。再给予后肢足背皮下注射百日咳疫苗(BPV)0.1ml,以增加血脑脊液屏障通透性,建立大鼠模型。 2.76只雌性Wistar大鼠随机(数字表法)分成6组,模型组(EAE+生理盐水)16只,激素组(EAE+醋酸地塞米松片6.25mg/kg· d),中药高剂量组(EAE+中药53.3g/kg·d),中药中剂量组(EAE+中药26.7g/kg·d),中药低剂量组(EAE+中药13.3g/kg·d),空白组(不做任何处理),每组各12只。将免疫抗原注射日定为第0天,不同剂量中药组大鼠造模前7d开始给药、强的松组大鼠在抗原免疫后第1天开始给药,每天一次。观察各组大鼠神经功能评分,并观察大鼠的食量、体重、行为学等变化。 3.分别于大鼠免疫第15天取材,取大鼠大脑神经组织,给予苏木-伊红染色,进行病理学观察。并测定免疫组化MBP光学密度值,比较各组大鼠的MBP的的表达。 结果:1.各组大鼠的行为学改变:(1)发病率:空白组除意外死亡,发病率、体重下载指数、神经功能评分为零;与模型组相比,中药高、中、低组及激素组较模型组低,(P<0.05);中药高、中剂量组与激素组相对比,无明显差异(P>0.05);中药中、低剂量组高于激素组(P<0.05);中、低剂量组高于高剂量组(P<0.05)。(2)体重比较:造模前各组大鼠体重均值比较为差异不明显(P>0.05);造模后15天(急性期),与模型组比较,中药高、中、低剂量组、激素组大鼠的体重下降指数低于模型组(P<0.05);与激素组比较,中药高、中体重下降无显著差异(P>0.05);中药高、中、激素组较中药低剂量组下降低(P<0.05)。(3)神经功能评分比较:免疫后15天,与模型组比较,激素组、中药高、中、低剂量组神经功能评分均低于模型组(P<0.05);中药低剂量组与模型组比较,神经功能评分差异不明显(P>0.05);中药高、中剂量组、激素组对比,神经功能评分无显著差异(P>0.05)。 2、各组大鼠的病理形态学改变:免疫后15天,与模型组相比,空白组、激素组、中药高、中、低剂量组的炎病灶少于模型组,有明显差异(P<0.05);与激素组相比,中药中、低剂量组病灶数多于激素组,有明显差异(P<0.05);中药高剂量组与激素组相比平均病灶数无明显差异(P>0.05);与中剂量组相比,平均病灶数无明显差异(P>0.05);与中药低剂量组相比,平均病灶数低于中剂量组,有明显差异(P<0.05)。 3、各组大鼠的免疫组织化学改变:空白组大鼠侧脑室周围MBP表达无异常;与模型组比较,模型组MBP表达明显减少(p<0.01);中药高剂量组、激素组与EAE、中药中、低剂量组之间MBP表达比较,前者MBP表达增强(p<0.01);中药高剂量组与激素组之间比较,MBP表达表达无明显差异(p>0.05);中药高剂量组和中药中、低剂量之间比较,前者MBP表达增强(p<0.01)。 结论:1、本实验成功的建立了实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)动物模型。 2、滋阴固本方可以降低EAE大鼠的发病率,减少体重下降,减轻发病时神经功能损伤的评分,缓解临床症状。 3、滋阴固本方可以减轻EAE大鼠中枢神经系统内炎性细胞浸润、水肿的程度,减轻免疫反应,保护大鼠脑神经的损伤。 4.滋阴固本方能够明显减轻大鼠脑神经碱性髓鞘蛋白(MBP)的脱失,减轻免疫反应,并能促进碱性髓鞘蛋白的再生与修复。