最近的研究表明角质形成细胞的凋亡在湿疹性皮炎慢性化中起着关键的作用。角质形成细胞的凋亡导致细胞间连接的破坏,真皮内水分渗入表皮内,在表皮内形成海绵样病变,这可以使皮肤的屏障功能受到损害,从而加重湿疹性皮炎。因此,角质形成细胞的凋亡为湿疹性皮炎慢性化的转折点,阻断角质形成细胞的凋亡可以减轻湿疹慢性化进程的发生,从而为湿疹性皮炎的治疗提供了一条新的途径,成为药物筛选的一个新靶点。流式细胞仪可以定量检测细胞的凋亡,此方法虽然敏感准确,但是需要一定量的细胞和大量的试剂,并且操作复杂、耗时,不适合用于高通量的药物筛选。Sulphorhodamine B(SRB)和Microtetrazolium (MTT)方法是检测细胞增殖情况的快速、简便的96孔板检测方法,如果能区分出细胞的增殖抑制是由凋亡而不是坏死引起的,就可用此方法初步筛选抑制细胞凋亡的药物。本实验中用干扰素-γ(IFN-γ)和抗Fas单克隆抗体(antiFas Ab)共同作用诱导角质形成细胞HaCaT凋亡,部分模拟湿疹性皮炎的发病机制,以用于筛选治疗湿疹性皮炎的药物。通过比较SRB和MTT两种检测方法选用更敏感、准确的SRB方法以及用流式细胞仪同步监测SRB检测结果,建立了用SRB初步筛选抗细胞凋亡药物的方法,从而为筛选湿疹性皮炎的治疗药物奠定了实验基础。方法:IFN-γ和antiFas Ab单独或联合作用于体外培养的角质形成细胞株HaCaT,流式细胞仪检测细胞表面Fas抗原的表达和细胞的凋亡情况并检测caspase抑制剂z-VAD-FMK对HaCaT细胞凋亡的影响。比较SRB和MTT方法在线性、日内变异及日间变异上的差异,选用更精确的方法检测HaCaT细胞的增殖情况。流式细胞仪同步检测SRB方法的