研究目的：探讨基因Ercc61在P19胚胎癌细胞及P19分化细胞中的表达情况，并构建Ercc61的正、反义真核表达载体，在细胞学水平对基因功能进行初步研究。 研究方法：用一定浓度的二甲亚砜(DMSO)和维甲酸(RA)分别诱导处理P19胚胎癌细胞，使其分别向心肌细胞方向和神经细胞方向分化，提取P19细胞总RNA，RT-PCR检测P19细胞诱导分化前后Ercc61 mRNA的表达变化。用限制性内切酶Xho Ⅰ和Kpn Ⅰ双酶切含目的基因的pGEM-T-Ercc61载体，获得目的基因Ercc61序列，将其插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)和pcDNA3.1(-)Myc His6多克隆位点的Xho Ⅰ和Kpn Ⅰ的酶切位点，相连构成基因表达质粒。将重组后的质粒进行细菌转化，先菌落PCR鉴定，然后质粒扩增、纯化后，再限制性内切酶Xho Ⅰ和Kpn Ⅰ酶切鉴定。以脂质体介导的方法体外瞬时转染正义载体至P19细胞，RT-PCR检测基因在细胞内的表达活性情况，并用MTT法测定转染后细胞增殖活性变化。联合化疗药物顺铂处理P19细胞，MTT比色法检测药物对细胞凋亡的影响，同时分析用顺铂处理P19细胞后，Ercc61mRNA的表达变化。 研究结果：RT-PCR检测表明，基因Ercc61在P19胚胎癌细胞中不表达，DMSO和RA分别诱导处理P19细胞后，在诱导期及向心肌细胞方向和神经细胞方向分化的细胞中均检测到Ercc61 mRNA表达活性；化疗药物顺铂处理P19细胞未观察到Ercc61基因表达的变化；将Ercc61的蛋白编码序列亚克隆至pcDNA3.1(+/-)，菌落PCR筛选得到的阳性菌落提取重组质粒经酶切鉴定，表明成功构建了Ercc61的正义和反义表达载体。 结论：初步推断基因Ercc61可能参与P19胚胎癌细胞向心肌细胞分化和神经细胞分化及发育的调节过程；顺铂处理P19不影响Ercc61基因表达；成功构建了Ercc61正义及反义真核表达载体，为进一步的基因功能研究提供了基础。