高致病性禽流感（Avian influenza,AI）是由A型流感病毒H5N1引起的烈性传染病。近年来,该疾病随着候鸟迁徙不断向各国传播,在造成巨大的经济损失的同时,也引起了多例人感染禽流感的病例,因此,对禽流感防治手段的研究引起了广泛重视。中和单抗是防治病毒性疾病的一种很有效手段。但是由于禽流感病毒基因突变频率高,尤其以血凝素（HA）基因为最,因此针对禽流感病毒的中和单抗中和谱较窄,往往只能中和少数遗传变异亚系的病毒,这就极大限制了这些中和单抗的应用。本实验室所制备的单抗13D4具有广谱中和活性,能有效中和41株不同遗传变异亚系的H5N1病毒代表株,在禽流感的防治中具有广阔的应用前景。本研究通过实验摸索,建立了一套低成本,简便高效的13D4全抗体和F（ab）’₂的纯化制备方法,在中试规模生产中能够制备出符合国家检定标准的产品,纯度达到99%左右,得率为60%,为该抗体药物的成功奠定了基础。为了进一步揭示13D4广谱中和活性的机制,本研究还进行了13D4 Fab片段晶体的培养。通过对13D4 Fab片段培养条件的筛选和优化,制备出了能用于X射线晶体衍射的单晶。另外,本研究还通过分子模拟的方法,得到了抗体13D4 Fab片段以及A/Ck/HK/Yu22/02（H5N1）HA1的三维结构,并通过Fab分子依次与已有晶体结构的3个H5亚型HA以及模拟的HA1分子进行对接,预测单抗13D4可能结合表位为:由13个Glu¹¹²,Lys¹¹³,Ile¹¹⁴,Pro¹¹⁸,Ser¹²⁰,Ser¹²¹,Ser¹²³,Lys¹⁶¹t,Arg¹⁶²,Ser¹⁶³,Tyr¹⁶⁴,Asn¹⁶⁸,Lys²⁵⁵不连续氨基酸残基组成的构象表位。还利用分子对接结果分析H5亚型禽流感的广谱中和表位和,综合单个Fab分子与4个HA分子的对接结果用于寻找该单抗识别的HA抗原表位,用于寻找与抗原良好契合的多肽结构。13D4 Fab片段上可能用于治疗禽流感的多肽片段为Gln²⁷-Thr²⁸-Ser³¹-Gly³¹-Leu⁵²-Gly⁵⁴-Ser⁵⁵-Asn⁵⁷-Thr¹⁰⁰-Thr¹⁰¹-Ala¹⁰²-Val¹⁰³。