抑癌蛋白UBIAD1及其突变体在人体细胞中的表达分布及功能探究

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UBIAD1蛋白作为人体中两种重要物质维生素K2及CoQ10的生物合成酶,不仅与多种肿瘤的发生发展相关,还能够以直接的方式参与胆固醇代谢调控,在生物体中发挥抵抗过氧化损害保护心血管的作用。UBIAD1的跨膜区保守氨基酸突变能够导致罕见遗传病SCCD的发生,它的更多生理,病理作用仍在被发现的过程中。作为生物体中一个多功能的,极为重要的蛋白,UBIAD1在细胞中的亚细胞定位也一直存在争议,已有的研究结果表明,于不同细胞系中,UBIAD1蛋白的定位情况迥然不同。  在本文中,我们主要利用免疫荧光染色、过表达融合质粒、MTT实验等方法,验证了UBIAD1蛋白在人体细胞HEK293T和膀胱肿瘤细胞T24中的表达分布和生长抑制功能。结果显示,外源性的UBIAD1蛋白在正常细胞HEK293T和肿瘤细胞T24中均能在内质网和高尔基体两种细胞器上分布,且在高尔基体上呈现聚集现象,但内源表达的UBIAD1蛋白主要显示出在内质网上均匀分布,在高尔基体上的聚集现象不明显。UBIAD1蛋白N端的71、72、73位氨基酸LAY对其在内质网上滞留分布最为关键。破坏已知的UBIAD1蛋白的高尔基体定位信号RPWS后,突变体会专一地滞留在内质网上而不会发生弥散。UBIAD1蛋白及其内质网滞留信号破坏的突变蛋白均能抑制肿瘤细胞T24的生长,但均不影响正常细胞HEK293T的生长;添加维生素K2能够显著地促进UBIAD1内质网滞留信号突变体对T24细胞的生长抑制作用。
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