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目的:脓毒症是机体对感染的一种失控的全身性炎症反应综合征(SIRS),是严重感染、创伤、烧伤、大手术后、重型胰腺炎和休克等常见的并发症,进一步发展可导致脓毒症休克、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)和多器官功能障碍综合征(MODS)。近30年脓毒症的发病率每年以1.5-8%的比例上升,病死率平均高达40%,是危重症患者死亡的主要原因。目前对脓毒症的治疗没有突破性进展,原因是其发病机制复杂,涉及炎症、免疫、凝血及组织损害等一系列问题,并与多系统器官病生理改变密切相关。其中内皮细胞(EC)占据着核心地位,它是炎症级联反应的调控者,是宿主对脓毒症反应的重要组成部分,其结构和功能改变可能是脓毒症发生、发展的中心环节,进而促进特异性位点炎症反应的循环发生、凝血系统激活以及细胞间的相互作用,最终导致微血管内血栓形成、低氧血症和器官功能障碍。因此,EC的活化和损伤与脓毒症密切相关。近年来国外研究证明他汀类药物治疗脓毒症具有抗炎、抗凝、减轻重要脏器损伤等作用并能降低其发病率及死亡率,成为近年脓毒症治疗研究的热点,其主要机制之一可能与保护血管内皮功能有关。本研究应用盲肠结扎穿孔(CLP)的方法制作脓毒症大鼠模型,通过设立多个时间点观察脓毒症时辛伐他汀的内皮保护作用机制,以期减少并发症、降低死亡率,为脓毒症的临床用药提供理论依据。方法:清洁级雌性wistar大鼠80只,体重200-250g(河北医科大学实验动物学部)。随机分为4组,Ⅰ组:健康对照组(8只);Ⅱ组:假手术组(8只);Ⅲ组:造模组(32只);Ⅳ组:给药后造模组(32只)。采用CLP法制作大鼠脓毒症模型,以术后大鼠出现精神倦怠、腹胀、躁动、寒战、眼角分泌物增多、毛发凌乱,处死后见腹腔有血性渗液,盲肠肿胀变黑、粘连,空肠肠管胀气等表现,确定脓毒症制模成功。其中Ⅳ组造模前采用胃管给药(辛伐他汀20mg/kg/day),每日一次,连续2周后行CLP;其他三组同等体积的生理盐水连续灌胃2周。Ⅰ组大鼠活杀留取血液及胸主动脉标本。Ⅱ组术后6h留取血液及胸主动脉标本。Ⅲ组及Ⅳ组分别于术后3h、6h、24h及48小时(每个时间点8只)留取血液及胸主动脉标本。测各组大鼠肛温及血常规协助确立造模成功;观察死亡情况,计算各组大鼠病死率;用ELISA法检测血清E-选择素、血管性血友病因子(vWF);用Western印迹法分析诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)在脓毒症过程中蛋白表达的变化。结果1大鼠一般表现:Ⅲ组及Ⅳ组大鼠在CLP后2~3h可自由饮水,6~8h出现精神倦怠、腹胀、躁动、寒战、排稀便、眼角分泌物增多、毛发凌乱,进食、进水减少,处死后可见腹腔有血性渗液,盲肠肿胀变黑、粘连,空肠肠管胀气,肺肝等脏器化脓,可闻及恶臭等表现。Ⅱ组大鼠外观正常、活动如常,腹腔内各脏器无明显病理改变,表面光滑,全部动物均存活。2白细胞计数结果:Ⅰ组白细胞计数(6.78±0.94)×109/L,Ⅱ组稍高于Ⅰ组(P > 0.05) ;Ⅲ组3h白细胞数量(10.43±0.66)×109/L , 6h上升到(12.79±0.51)×109/L,后呈下降趋势,24h白细胞数量下降到(8.52±0.40)×109/L,但均高于Ⅰ组和Ⅱ组(P<0.05),48h下降到(7.45±0.59)×109/L,显著低于3h、6h组(P<0.05);Ⅳ组3h白细胞计数(8.79±0.70)×109/L,6h为(10.36±0.19)×109/L,与Ⅲ组同时间点比较均有下降(P<0.05)。3肛温结果:Ⅰ组与Ⅱ组大鼠肛温结果比较无差别(P>0.05);Ⅲ组6h出现肛温数值下降(35.1±0.83℃),24h达最低(33.8±1.45℃),但只有24h显著低于Ⅰ组和Ⅱ组(P<0.05);Ⅳ组3h肛温(35.8±0.55℃)低于Ⅲ组3h肛温(36.4±1.05℃)(P<0.05)。4病死率结果:Ⅲ组及Ⅳ组24h病死率均为50% (P>0.05);Ⅲ组48h病死率为75%,Ⅳ组为50%,两组比较有统计学意义(P<0.05);其它组死亡率为0%。5 E-选择素检测结果:Ⅰ组E-选择素表达最低,Ⅱ组与Ⅰ组比较稍有增高(P>0.05);Ⅲ组3h E-选择素有明显升高,6h达高峰,24h后呈下降趋势,并均高于Ⅰ组(P<0.05)和Ⅱ组;Ⅳ组3h、6h、24h及48h E-选择素与Ⅲ组比较均有下降,但两组相比只有3h、6h有统计学意义(P<0.05)。6 vWF检测结果:Ⅰ组有少量vWF的表达,Ⅱ组与Ⅰ组比较稍有增高(P>0.05);Ⅲ组与Ⅳ组vWF均高于Ⅰ组和Ⅱ组(P<0.05);Ⅲ组3h vWF有明显升高,6h达高峰,24h后呈下降趋势,Ⅳ组3h、6h、24h及48h vWF与Ⅲ组比较均有下降,两组3h、6h、24h比较均有统计学意义(P<0.05)。7 iNOS检测结果:Ⅰ组iNOS蛋白表达较弱,Ⅱ组略有增强(P>0.05);Ⅲ组iNOS蛋白表达高于Ⅰ组和Ⅱ组(P<0.05);Ⅲ组3h iNOS蛋白表达即有明显增强,6h达高峰,24h后呈减少趋势,但仍维持较高水平,Ⅳ组3h、6h、24h及48h iNOS蛋白表达与Ⅲ组比较均有减弱(P<0.05)。8 eNOS检测结果:Ⅰ组eNOS蛋白表达最强,Ⅱ组表达稍减弱(P>0.05);Ⅲ组eNOS蛋白表达低于Ⅰ组和Ⅱ组(P<0.05);Ⅲ组3h eNOS蛋白表达即有明显减少,6h达最低,24h后较前增强,Ⅳ组3h、6h、24h及48h eNOS蛋白表达与Ⅲ组比较均有增强,两组比较除48h外均有统计学意义(P<0.05)。结论1应用CLP的方法成功制造出大鼠脓毒症模型。2脓毒症时血清E-选择素及vWF明显升高,胸主动脉iNOS蛋白表达明显增强、eNOS蛋白明显下降。3辛伐他汀可降低脓毒症大鼠血清E-选择素和vWF水平。4辛伐他汀可降低脓毒症大鼠iNOS蛋白水平,提高eNOS蛋白的表达。证实了辛伐他汀在蛋白水平能纠正脓毒症时iNOS与eNOS比例失衡状态,保护内皮功能。5辛伐他汀能改善脓毒症大鼠48h病死率。