【摘 要】
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目的:观察RNA干扰技术(RNAi)对乳腺癌MDA-MB-231细胞VEGF-C表达的影响。方法:制备针对VEGF-C的三种siRNA(small interfering RNA),分别是siRNAa、siRNAb、siRNAc,筛选靶向基
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目的:观察RNA干扰技术(RNAi)对乳腺癌MDA-MB-231细胞VEGF-C表达的影响。方法:制备针对VEGF-C的三种siRNA(small interfering RNA),分别是siRNAa、siRNAb、siRNAc,筛选靶向基因最有效的siRNA,据此设计shRNA ( short hairpin RNA )寡核苷酸链,构建pGenesil-1/VEGF-C重组质粒表达载体。将此质粒转染人乳腺癌细胞MDA-MB-231,采用RT-PCR、免疫细胞化学染色法和Western blot方法检测VEGF-C的变化情况。结果:RT-PCR结果显示siRNAa、b、c对MDA-MB-231均有抑制作用,以siRNAa最显著,抑制率为72.1%。利用针对siRNAa合成的shRNA与质粒pGenesil-1成功构建表达载体pGenesil-1/VEGF-C,转染MDA-MB-231后,RT-PCR、免疫细胞化学染色法和Western blot方法检测均表明VEGF-C的表达明显受到抑制(P<0.05)。结论: shRNA RNAi技术可以有效沉默人乳腺癌细胞株MDA-MB-231中VEGF-C的表达,提示该技术可能是抑制乳腺癌淋巴管生成的有效手段。
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