拟南芥转录因子MS188与AMS相互作用共同调控CYP703A2以及孢粉素的合成

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众所周知,高等植物在花药中产生雄配子体即花粉,是植物完成生殖过程的一个重要环节。对花粉发育的过程以及分子机理研究具有重大的理论意义;植物雄性不育的现象为人们进行杂交育种提供便利途径,因此对花粉发育的深入研究又有重要的应用价值。绒毡层是花药中紧贴小孢子的一层孢子体细胞层,由花药次级壁细胞分化而成,在小孢子释放,营养供给和花粉壁的形成等过程中至关重要。绒毡层的细胞命运决定,发育以及行使正常生物学功能需要一些关键转录因子在时空上进行复杂而有序的调控。在模式植物拟南芥中,MS188(AtMYB103/MYB80)编码一个R2R3-MYB家族的转录因子,是绒毡层中后期发育的一个重要基因。在ms188突变体中,绒毡层细胞在转变成分泌型细胞后,出现空泡化现象,残存的小孢子没有外壁外层。虽然很多孢粉素合成酶的基因在ms188突变体中表达量严重下调,但目前对于MS188调控下游孢粉素合成基因的机制仍不清楚。在本论文中,通过比较AMS-GFP、MS188-GFP和CYP703A2-GFP蛋白水平的分布,发现这些蛋白皆在绒毡层中高效表达;染色质免疫共沉淀(ChIP)以及凝胶阻滞电泳(EMSA)实验表明MS188能够在体内直接结合在CYP703A2的启动子上;把MS188基因构建在AMS启动子后转入ams突变体中,MS188恢复表达,但CYP703A2并未完全恢复表达,表明CYP703A2的正常表达不仅仅依赖于MS188;酵母双杂交以及蛋白质免疫共沉淀Co-IP实验表明AMS和MS188能够在植物体中产生相互作用;此外,在烟草叶片中利用强启动子驱动AMS和MS188基因表达后,发现报告基因CYP703A2-GFP也开始表达。这些结果表明,CYP703A2在体内的表达受到AMS和MS188共同调控,从而参与到孢粉素的合成途径中。
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