银杏组织与细胞培养及银杏内酯B产生的研究

来源 :中国协和医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:QQ403402618
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银杏植物体内所含的萜内酯主要有银杏内酯(Ginkgolides,GK)A,B,C,J,M和白果内酯(Bilobalide,BB),均为银杏植物所特有。GK是天然的血小板活化因子(PAF)受体特异拮抗剂,对治疗哮喘,内毒素休克,器官移植排斥反应,心脑血管疾病及多种炎症疾病均有较好的效果,其中GKB的效果最好。目前,银杏萜内酯来源于银杏树叶,人们还试图通过其他途径来生产银杏萜内酯,如化学合成,植物组织细胞培养技术。从长远来看,通过细胞培养技术生产银杏萜内酯是一条较为有效的途径。本论文从银杏愈伤组织的诱导开始,进行了愈伤组织及细胞悬浮培养,最后达到生物反应器培养,并进行了单细胞克隆,再生根形成等较为系统的研究,取得了如下的结果: 1.单一激素种类对银杏叶片、叶柄和幼茎愈伤组织的诱导中以NAA的效果最佳,2,4-D次之,6-BA最差。除胚乳外,银杏胚,幼苗的胚根、子叶、幼茎、叶片和叶柄,树的幼茎、叶片和叶柄各外植体都能诱发愈伤组织,其中胚、子叶和叶柄愈伤组织形成的频率均可达到100.0%,胚根的愈伤组织形成频率最低,为33.3%。叶片和幼茎在光照下的愈伤组织诱导频率比黑暗中略高,而叶柄和胚根的则相反。MS和DCR两种培养基都适合银杏幼苗叶片及叶柄愈伤组织诱导,两者之间不存在显著性差异。 2.1)建立了银杏愈伤组织培养物中银杏内酯提取和初步纯化及其中含量的HPLC测定的方法。样品用丙酮提取,经石油醚、聚酰胺、Sephadex LH-20凝胶小柱初步纯化后进行RP-HPLC分析,流动相为甲醇-水(33:67),流速1.0mL.min-1,检测波长220nm,获得了良好的分析效果,测得Gb1、Gb2、Gb3 3个愈伤组织系GKB的含量分别为0.057%、0.084%、0.0145%。
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