转基因pemG1及HaHR3作物的获得及功能分析

来源 :安徽农业大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:anmy
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
来源于稻瘟菌(Magnaporthe grisea)的激活蛋白pemG1能促进种子萌发和幼苗生长,提高棉花烟草的抗病性。棉铃虫(Helicoverpa armigera)是一种危害性非常大的农业害虫,由于它的取食寄主比较广泛,每年都给我国及全世界造成巨大的经济损失,长期使用的化学农药会使棉铃虫产生抗药性,也会造成环境污染。通过抑制其蜕皮来达到杀虫目的是一条较好的途径。本实验选择的目的基因是棉铃虫蜕皮调节转录因子-激素接受子3基因(HaHR3),它调控蜕皮过程中相关基因的表达,可与DNA上特定的序列结合,参与蜕皮激素诱导的晚期基因的转录活性产物的调控。为探讨PemG1蛋白在植物中诱导抗病性和促进生长的功能及通过应用植物介导的RNA干涉基因沉默技术抑制蜕皮调节转录因子的表达,阻碍棉铃虫幼虫的正常变态发育,生态调控棉铃虫种群数量,为棉铃虫的有效防治提供一条新的途径。本文构建了含目的基因pemG1的植物表达载体pCAMBIA2300-Ubi-pemG1-Ocs,通过农杆菌介导法转化珂字312和中棉24棉花茎尖和下胚轴,经过一系列组织培养和茎尖离体培养过程获得转化了抗性植株,并对获得的抗性植株进行PCR、测序、R T-PCR、 Southern检测,确定了转基因阳性植株,并对阳性株进行棉花枯萎病菌接种试验,观察转基因棉花对棉花枯萎病的抗性;通过构建好了的含棉铃虫蜕皮调节转录因子HaHR3基因的正反向RNA干扰载体pCAMBIA-RNAi-HaHR3,利用农杆菌介导法转化三生烟叶圆片得到转基因烟草,通过相关分子检测,鉴定相关基因在受体植物内的整合,转录,分析转基因植株的抗虫性状,这一研究为下一步通过植物介导的RNA干扰技术防治棉铃虫打下了坚实的基础。本研究获得的主要结果如下:1.构建了植物表达载体pCAMBIA2300-pemG1, pCAMBIA2300-RNAi-HaHR3,该载体含有组成型花椰菜病毒组成型启动子35S,章鱼碱合成酶基因终止子以及卡那霉素抗性基因nptⅡ(neomycin phosphotransfers Ⅱ)。对载体进行了酶切和测序检测,通过冻融法将载体转化了根癌农杆菌(Agrobactrium tumefaciens)菌株LBA-4404,可用于农杆菌介导法转化棉花和烟草。2.分别通过农杆菌介导法转pCAMBIA2300-pemG1,pCAMBIA2300-RNAi-HaHR3棉花下胚轴,茎尖,通过抗生素的浓度筛选及组合,继代培养基配方的摸索,激素组成的调节等,最终得到经过卡那霉素筛选的抗性植株。3.通过农杆菌介导法转pCAMBIA2300-RNAi-HaHR3烟草叶圆片法获得抗性植株,并得到T2代。4.通过PCR,PCR产物TA克隆测序验证阳性转化株。Southern杂交验证了PemG1, HAHR3在棉花,烟草中的整合,RT-PCR验证了pemG1,HaHR3的转录。5.比较分析不同激素不同浓度组合的BAP和NAA生长激素对茎尖出芽的影响,结果确定选取0.1mg/L的BAP和NAA组合最适合芽的诱导;6.分析了转pemG1棉花转化株的相关抗病性,农艺形状。HAHR3烟草转化株的抗棉铃虫生测。对抗棉花枯萎病有一定的防治效果,HAHR3烟草转化株对棉铃虫的正常生长发育起到显著的抑制作用。
其他文献
目的:探讨了开展人性化护理的有效方法,并总结护理工作质量提升效果.方法:选取近期在本院住院分娩的孕产妇共200例,随机均分为两组,每组各100例,对照组行常规护理管理,观察组
教育事业中有一个非常重要的组成部分就是高职院校,高职院校在教育事业中有着巨大的作用.基于此,本文分析了高职院校学生管理的难点,并对此类难点做出了一系列改进的方式,对
目的:探讨责任制整体护理在呼吸内科优质护理服务中应用的效果.方法:将2017年10月至2018年4月期间我院呼吸内科接收的132例患者随机分成观察和对照两组(n=66例),采取不同的护
目的:分析羊水栓塞患者应采取的护理措施和效果.方法:随机抽取本院自2012年11月至2017年12月收治的羊水栓塞患者46例,采用随机数字表法将其分为对照组与观察组均23例,对照组
目的:研究在促进自然分娩中采取助产士心理护理的临床效果.方法:本次数据统计以不同护理模式将2015年10月至2017年10月期间在山西省晋中市第一人民医院分娩的64例单胎头位妊
目的:探讨个性化护理干预对口腔颌面部损伤后口腔功能与伤口的影响.方法:选取2016年2月至2017年4月在我院接受治疗的口腔颌面部损伤患者64例作为研究对象,根据患者入院先后顺
目的:探究在脑卒中偏瘫患者中运用常规康复治疗联合MTD平衡仪训练在步行及ADL能力的作用分析.方法:于2016年11月—2018年1月我院收治脑卒中偏瘫患者52例,按照入院顺序随机平
大麦黄矮病毒是禾谷类作物的重要病原,寄主包括燕麦、小麦、大麦等。自然条件下,该病毒由蚜虫在寄主植物间进行传播,并常引起作物的黄矮病毒病,造成严重的产量和品质损失。在中国
目的:将整体责任制护理服务运用在无痛分娩产妇的助产中,分析和研究实施效果.方法:此文实施研究的数据源自2017年1月至2018年1月在本医院无痛分娩的60例产妇,依据随机数字表
目的:探讨在肺癌患者的护理中应用感动服务是否具有很高的价值.方法:选取2016年1月—2017年12月在我市医院进行救治的46个肺癌病人,均等划分为A组和B组,每组23个.A组病人采取