目的:明确MTX周期联合CTX是否通过JAK-STAT3通路抑制CIA小鼠脾脏Na?ve T细胞向Th17细胞分化。方法:本实验以DBA1小鼠为研究对象,包括体内实验和体外实验两部分。体内试验:选取雄性DBA1小鼠56只,随机分为正常对照组10只和CIA组46只。建立CIA模型后根据拟用药不同随机分为4组:CIA组、MTX组(1.5 mg/kg/3d)、CTX组(30 mg/kg/10d)和MTX+CTX组(联合组,MTX:1.5 mg/kg/3d,CTX:30mg/kg/10d)。加强免疫3周后开始给药,治疗过程中连续监测各组小鼠左踝关节肿胀度及关节炎指数d(arthritis index,AI)。给药11周后处死小鼠,取双膝、左踝关节包埋、切片,进行HE染色,观察病理改变。分选脾细胞中的Na?ve T细胞,经细胞因子IL-6、TGF-β1、IL-1β、IL-23刺激于37℃5%CO2细胞培养箱中培养96小时,用流式细胞术检测培养后Th17细胞所占比例,用RT-PCR检测分化后Th17细胞中STAT3的表达水平。体外实验:选取雄性的DBA1小鼠20只建立CIA模型,7周时处死,分选脾淋巴细胞中的Na?ve T细胞,分为空白对照组、抗CD3CD28激活组(激活组)、刺激Th17细胞定向分化组(Th17分化组)、CTX组、低浓度MTX组(MTX低组)、中浓度MTX组(MTX中组)、高浓度MTX组(MTX高组)、MTX低+CTX组(低联合组),在37℃5%CO2细胞培养箱中培养96小时,用流式细胞术检测培养后Th17细胞所占比例,用RT-PCR检测分化后Th17细胞中STAT3的表达水平。结果:1.体内实验(1)治疗前,各治疗组小鼠关节肿胀度、AI与CIA组相比,差异无统计学意义;治疗4周后,各治疗组小鼠关节肿胀度、AI较CIA组改善明显,差异有统计学意义,各治疗组间差异无统计学意义;治疗11周后,联合组小鼠关节肿胀度、AI较CIA组、CTX组改善明显,差异有统计学意义,联合组较MTX组改善明显,但差异无统计学意义;(2)治疗11周后,各治疗组Th17细胞所占百分较CIA组明显降低,差异有统计学意义,联合组Th17百分率较单用药组降低明显,但差异无统计学意义;(3)治疗11周后,各治疗组Th17细胞中STAT3 m RNA的表达均低于CIA组,差异有统计学意义,联合组Th17细胞中STAT3 m RNA的表达低于单用药组,但差异无统计学意义。2.体外实验(1)体外培养96h后,Th17分化组Th17细胞所占百分比与空白组、MTX中组、MTX高组、低联合组相比,差异有统计学意义;低联合组与单用药组相比,培养后Th17细胞所占百分比降低,差异无统计学意义;(2)体外培养96h后,Th17分化组Th17细胞中STAT3 m RNA的表达与空白组、MTX中组、MTX高组、低联合组相比,差异有统计学意义;低联合组与单用药组相比,培养后Th17中STAT3 m RNA的表达降低,差异无统计学意义。结论:MTX周期联合CTX可能通过JAK-STAT3通路影响CIA小鼠Th17细胞的分化。