微生物接种剂对油菜和西葫芦病害防治及其促生作用研究

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植物病害是植物在生物或非生物因子影响下,发生一系列形态、生理和生化上的病理变化,阻碍了植物正常生长、发育进程,从而影响经济效益的现象。其中,油菜菌核病(Sclerotinia sclerotiorum)是一种世界性油菜病害。该病在我国油菜产区均有发生,是影响我国油菜产量和品质的第一大病害。西葫芦根腐病的致病菌之一是尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum),在土壤中的腐生竞争能力强,存活时间长,因此被认为是西葫芦根腐病中极具破坏力的病原物之一。目前,利用植物根际促生菌(Plant growth promoting rhizobacteria,PGPR)制剂防治这两种病害已经成为国内外学者关注的重点之一。因此,研究PGPR菌株资源对防治植物病害有着重要的意义。本研究以前期研究获得的19株PGPR菌为对象,测定了菌株的溶磷(溶磷圈法和钼蓝比色法)、固氮(乙炔还原法)和分泌生长素(高效液相色谱法)特性;测试了PGPR菌对油菜菌核病菌和尖孢镰刀菌的拮抗作用(平板对峙生长法),及其对其他病原菌的拮抗作用;研究了微生物接种剂对油菜菌核病和西葫芦根腐病的生防效果;鉴定了优良生防菌株(形态学观察、生理生化和分子生物学方法);研究了微生物接种剂对油菜幼苗和西葫芦生长的影响。主要研究结果如下:1.各PGPR菌株促生特性差异较大供试的19株PGPR菌中,13株具有良好的溶解磷酸钙能力(溶磷量3.79-204.74μg/m L);14株具有较强的固氮能力(固氮酶活性7.14-246.46 nmol C2H4·h-1mL-1);10株具有分泌IAA的能力(分泌量4.34-54.36μg/mL)。2.筛选到具有较强拮抗6种病原菌的PGPR菌株菌株LHS11和FX2对油菜菌核病菌、尖孢镰刀菌、黄瓜枯萎病菌、小麦长蠕孢、番茄早疫病菌和立枯丝核菌的抑菌活性均较好,菌株LHS11的抑制率分别达到85.71%、65.98%、67.38%、71.03%、65.34%和69.53%,菌株FX2的抑制率分别达到82.14%、66.80%、69.07%、78.17%、70.52%和73.82%。菌株LHS11和FX2能使病原菌菌丝发生不同程度扭曲变形,其次生代谢物(发酵液)对部分病原菌起到抑制作用。综合分析菌株LHS11和FX2具有较广谱的抑菌性,可以通过次生代谢物、营养和空间位点竞争等多种方式抑制病原菌的生长。3.PGPR菌株中的拮抗菌分别为芽孢杆菌属和假单胞菌属将筛选得到的11株PGPR菌通过形态特征观察、生理生化和16S rDNA序列测定,鉴定结果为:菌株LHS11和FX2为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis);菌株XX2、LM4-3、F1-4和LX22为短小芽孢杆菌(B.pumilus);菌株XX6为简单芽孢杆菌(B.simplex);菌株FX1和XX1为蜡样芽孢杆菌(B.cereus);菌株XX5和PGRS-3为荧光假单胞杆菌(Pseudomonas fluorescens)。4.复合接种剂(LHS11+FX2)对油菜和西葫芦促生防病效果较好菌株LHS11和FX2对油菜菌核病菌的抑制率均大于80%,对尖孢镰刀菌的抑制率均大于60%,且菌株LHS11和FX2之间没有拮抗作用,将其制成不同组合处理的微生物接种剂。在油菜离体叶片和温室盆栽试验中,复合接种剂(LHS11+FX2)对油菜菌核病抑制率分别达到83.75%和80.51%;在西葫芦温室盆栽试验中,复合接种剂(LHS11+FX2)对西葫芦根腐病抑制率达到57.14%。此外,在油菜温室盆栽试验中,复合接种剂(LHS11+FX2)能显著增加油菜的株高、地上鲜重、地下鲜重和地下干重,和对照相比,分别提高了32.30%、73.87%、323.08%和186.67%。复合接种剂(LHS11+FX2)促生防病效果均好于单一接种剂。5.利用85%化肥+复合接种剂对西葫芦促生效果较好利用7株优良PGPR菌研制的西葫芦复合接种剂符合《微生物肥料》NY227-94标准。在田间试验中将其拌种与化肥配施,与无肥对照相比,发现复合接种剂配施化肥对西葫芦盛花期和成熟期的地上鲜重、地上干重、地下鲜重、地下干重、根表面积、根长影响显著,其中以85%化肥+复合接种剂处理效果较优,其对西葫芦成熟期的产量显著提高27.13%,在一定程度上节约了化肥投入成本和提高了增产效益。
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