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类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)是一种以侵袭性关节炎为主要表现的全身性自身免疫病。本病以女性多发,男女患病比例约1：3。RA可发生于任何年龄,以30-50岁为发病的高峰。我国大陆地区的RA患病率为0.2-0.4%。由于本病的病因及发病机制未完全明确,目前临床上尚缺乏根治及预防本病的有效措施。RA治疗的目的在于减轻关节症状、缓解病情进展、防止和减少关节的破坏、保护关节功能、最大限度提高患者的生活质量。应强调早期诊断、早期治疗、联合用药和个体化治疗的原则。治疗方法包括一般治疗、药物治疗、外科手术治疗,其中以药物治疗最为重要。T-614,是一种新型免疫调节剂,能够抑制炎症因子的产生,减轻关节炎症及关节损伤。目前,对T-614炎症抑制作用的研究主要停留在动物模型水平,而对RA患者离体滑膜细胞的炎症抑制作用的研究尚缺乏直接证据。第一部分筛选患者入组及采集标本目的：筛选活动性类风湿关节炎患者入组及采集滑膜标本方法：1.筛选患者入组：A.纳入病例标准(1)诊断符合2010年ACR/EULAR分类标准(2)年龄≥18岁B.排除病例标准(1)不符合以上诊断标准者(2)妊娠或准备怀孕的女性,或哺乳期女性(3)严重的心、肝、肾功能异常(超过正常值上限的1.5倍)(4)有酗酒史者(5)有恶性肿瘤者(6)对T-614有过敏史的患者(7)参加任何临床药物试验的患者2.采集标本：采集符合上述标准并行滑膜切除术治疗的患者的滑膜组织。结果：1.选取5例符合标准的患者入组。2.采集上述患者病变部位滑膜组织。结论：成功筛选了活动性类风湿关节炎患者入组及获取了RA患者病变部位滑膜组织。第二部分离体滑膜细胞培养及鉴定目的：研究类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞体外培养方法及鉴定方法方法：1.用Ⅰ型胶原酶体外培养法,对5例类风湿关节炎患者滑膜细胞组织标本进行原代培养及传代培养,观察培养的成纤维细胞形态及细胞增殖情况。2.原代细胞传代培养至3-4代时,应用细胞免疫组织化学染色方法,检测Vimentin及CD68表达水平,鉴定滑膜细胞类型。结果：1.成功培养了5例RA患者滑膜细胞。2.成纤维样滑膜细胞表现为Vimentin染色阳性,CD68染色阴性。结论：成功获得了RA患者成纤维样滑膜细胞。第三部分T-614抑制TNF-a产生目的：研究T-614对TNF-a的作用方法：1.将细胞分为4组,分别为：对照组、MTX组、T-614组和两药联用组。应用蛋白免疫印迹法(western blot)检测4组细胞内TNF-a蛋白表达水平。2.对上述4组,应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测4组细胞外TNF-a分泌水平。结果：1. western blot检测结果显示TNF-a表达水平由高到低依次为对照组(CTL组)、MTX组、T-614组、两药联用组。2. ELISA检测结果显示TNF-a分泌水平由高到低依次为对照组(CTL组)、MTX组、T-614组、两药联用组。结论：T-614有效地抑制TNF-a产生,与MTX联用抑制作用更加显著。