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目的：建立体外扩增C57BL/6小鼠树突状细胞(DC)的方法:应用反复冻融法制备FBL-3小鼠红白血病细胞肿瘤抗原并致敏DC，观察致敏DC培养上清对FBL-3小鼠红白血病细胞的诱导分化作用，初步探讨DC诱导白血病细胞分化作用的机制，为白血病的诱导分化治疗提供一条新的途径。
方法：
①应用1ng/ml白介素-4(IL-4)和10ng/ml粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)联合诱导培养C57BL/6小鼠骨髓细胞，光镜和电镜观察DC发育过程中形态学变化；流式细胞术检测DC表面分子CD80、 CD86、H-2Kb及I-Ab的表达情况。
②常规培养并收集C57BL/6小鼠红白血病细胞，反复动融法制备FBL-3肿瘤抗原，收集备用。
③制备的FBL-3肿瘤抗原与培养的C57BL/6小鼠DC共孵育，致敏DC。
④用ELISA法分别检测未致敏DC和致敏DC第8天培养上清中IL-12的浓度。
⑤分四组：标准IL-12组(阳性对照组)；用致敏DC第8天的培养上清与FBL-3细胞共培养72小时组(致敏组)；用未致敏DC第8天的培养上清与FBL-3细胞培养72小时(未致敏组)；RPMI-1640组(阴性对照组)。分化后细胞分别用瑞氏染色记数单核细胞数、透射电镜观察细胞的超微结构、流式细胞术检测细胞表面CD14分子的阳性表达率，观察三组的有何不同，并分析FBL-3细胞分化情况与IL-12浓度的关系。
结果：
①用IL-4和GM-CSF联合培养小鼠骨髓细胞3天后，可见细胞形态发生改变，细胞形态不规则；培养第6～8天，细胞表面出现较多毛刺样突起，拉长，为典型的DC特征；流式细胞仪检测DC表面分子有CD80、CD86、H-2Kb及I-Ab表达。
②致敏DC培养第8天DC上清中IL-12的浓度为：630.82±43.96pg/ml，未致敏DC培养第8天DC上清中IL-12的浓度197.37±15.6pg/ml，两组比较差异有统计学意义。
③经致敏DC培养第8天上清作用后的FBL-3细胞36.99±3.61％转化为单核细胞，经未致敏DC第8天DC培养上清作用72小时后的FBL-3细胞19.4±4.07％转化为单核细胞，致敏与未致敏两组比较具有统计学意义；透射电镜见：经致敏DC培养第8天上清作用后的FBL-3细胞部分具有了典型单核细胞的特性，如马蹄状核、细胞核核膜完整、线粒体、核糖体等细胞器清楚，而未致敏组上述特点少见；流式细胞仪分析显示：致敏DC培养第8天上清作用72小时后的FBL-3细胞分化后细胞表面CD14分子表达阳性率为35.35±3.32％，经未致敏DC第8天DC培养上清作用72小时后的FBL-3细胞分化后细胞表面CD14分子表达阳性率为16.08±3.07％，两者比较有统计学意义。
④对各组细胞的诱导分化率和培养上清中IL-12的浓度作相关性比较，结果显示两者高度相关。
结论：
①应用IL-4联合GM-CSF培养小鼠骨髓细胞，可大量扩增成熟DC，培养的DC符合其自身的特性。
②FBL-3细胞经致敏DC培养上清的诱导能转化为单核细胞(且转化率明显高于未致敏DC培养上清)，转化后的单核细胞符合其自身的特性。
③转化为单核细胞的比例与培养上清中IL-12的浓度成高度正相关关系，提示DC培养上清诱导作用的机制与IL-12有关。