【摘 要】
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人促卵泡激素(human follicle stimulating hormone,hFSH)是垂体前叶嗜碱性细胞合成和分泌的一种糖蛋白类促性腺激素。对于女性来说,FSH主要功能是卵巢细胞和雌激素生成必须
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人促卵泡激素(human follicle stimulating hormone,hFSH)是垂体前叶嗜碱性细胞合成和分泌的一种糖蛋白类促性腺激素。对于女性来说,FSH主要功能是卵巢细胞和雌激素生成必须的一种生长因子、促分泌剂和细胞生长调节剂;对于男性来说,其主要功能是与黄体生成素(LH)控制的睾丸素结合,从而激活和保持正常精子的数目和质量,是不孕不育的诊断和治疗中发挥着重要作用的一类药物。应用重组DNA技术生产的重组人促卵泡激素(rhFSH)具有标准化的分子量和生物学活性,避免了以前用于治疗的FSH由尿源提取在糖基结构上的差异,从而造成的FSH异构体生物活性上的差异。rhFSH具有与尿源性FSH相似的优良的安全特性,但却避免了尿源性FSH给药时可能出现的抗免疫反应。本研究采用基因重组技术,将人FSHα和β链的编码序列插入真核高表达载体。经序列分析,所获得的α和β链的基因重组子编码的蛋白序列,与天然的FSH的α和β链的氨基酸序列完全一致。随后将人FSHα和β链的重组质粒共转染至中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中表达,在CHO细胞内形成具有活性的α、β二聚体。经MTX加压筛选、ELISA检测,获得rhFSH阳性细胞克隆。对ELISA检测阳性细胞克隆进行有限稀释,我们挑选出了rhFSH表达量最高的细胞株(CHO-6),表达量达2mg/L。并对其表达条件进行了优化,确定其最佳的表达温度、培养方式为和最适宜的培养基。培养上清经亲和层析、凝胶过滤层析得到纯度99%以上的rhFSH。为以后的大规模生产奠定了良好的基础。
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