目的:青光眼是一种发病率很高的致盲性眼病,它导致视功能损害的病理基础是视网膜神经节细胞(RGCs)进行性死亡和视神经纤维的丢失。RGCs的死亡常常导致视功能发生不可逆性损害,目前已经公认RGCs的死亡方式是凋亡。青光眼治疗的最终目的是保护视功能。本课题借助原位末端标记法(TUNEL),通过观察银杏叶注射液对家兔慢性高眼压模型视网膜神经节细胞凋亡的影响,肯定银杏叶注射液对RGCs的凋亡具有一定的调控作用,进而证明银杏叶注射液对青光眼视神经损害有保护作用,为临床筛选中药对青光眼视神经保护的研究提供可能。 方法:选取健康成年家兔40只,体重2.0-2.5Kg,雌雄不拘。造模均选取家兔右眼。用100单位/0.25mlα-糜蛋白酶溶液后房注射进行造模。将造模成功的家兔随机分为噻吗心安组、银杏叶组、联合用药组和模型对照组,每组10只,于造模后72小时开始治疗。噻吗心安组用0.5%噻吗心安眼液点眼,2滴/次、1次/日;银杏叶组沿家兔耳缘静脉注射银杏叶注射液0.5ml/Kg,1次/日;联合用药组将上述两种方法合用,1次/日;模型对照组不予任何治疗。治疗5天后测量每组眼压,然后每组随机取2只实验兔,以后每隔5天每组各取2只,沿耳缘静脉注入空气栓塞处死,上直肌缝线定位,角巩膜缘处剪去角膜,取尽虹膜、晶体、玻璃体后一只实验眼沿视神经下方水平剖开分为二份,一份作光镜标本观察视网膜各层病理改变,一份作电镜标本观察细胞超微结构,另一只实验眼做TUNEL检测和正常节细胞计数。 结果: 1.眼压的变化:银杏叶组实验兔眼始终处于高眼压状态并且与模型对照组比较无显著性差异(P>0.05),说明银杏叶注射液没有降低眼压的效果,在同治疗期内,银杏叶组的眼压均高于噻吗心安组与联合用药组,和噻吗心安组、联合用药组比较有显著性差异(P<0.01)。噻吗心安组和联合用药组在治疗的第20天后,眼压已经降至正常范围,并且两组眼压值没有显著性差异(P>0.05)。 2.正常节细胞计数:在同治疗期内,噻吗心安组正常节细胞计数多于模型对照组,与模型对照组比较有显著性差异(P<0.01)。银杏叶组正常节细胞计数与噻吗心安组相当,均多于模型对照组,其与噻吗心安组比较无显著性差异(P>0.05),与模型对照组比较有显著性差异(P<0.01),说明银杏叶注射液对慢性高眼压造成的视网膜湖北中医学院硕士研究生学位论文神经节细胞的凋亡有调控作用,其作用有一定的时间性,由于高眼压的影响,其正常节细胞计数少于联合用药组(P<0.01)。噬吗心安虽然在降低眼压的同时对视神经有一定的保护作用,但其正常节细胞计数少于联合用药组,与联合用药组比较有显著性差异(P(0 .01)。 3.视网膜各层病理改变:模型对照组兔眼视网膜各层组织明显变薄,结构紊乱,层次不清,节细胞数目大量减少,内核层、外核层细胞间隙明显扩大,细胞排列紊乱;在治疗5天后,噬吗心安组病变轻于银杏叶组,联合用药组变化最小;治疗15天后,银杏叶组病变与曝吗心安组相似均轻于模型对照组,联合用药组变化最刁、。 4.细胞超微结构:模型对照组可见散在、多个神经节细胞呈现凋亡特征,其胞膜完整,细胞体积缩小,线粒体肿胀、空泡化,细胞核沿核膜皱缩,染色质浓缩、边集,有的核膜裂解,染色质分割成块状,形成凋亡小体。曝吗心安组与银杏叶组相似,病变均比模型对照组轻,可见部分神经节细胞出现凋亡特征。联合用药组变化最小,大部分节细胞呈正常形态,少数出现凋亡。 结论:高眼压是造成青光眼视神经损害的主要因素之一。银杳叶注射液能够调控慢性高眼压视网膜神经节细胞的凋亡,对高眼压导致的视神经损害有保护治疗的作用。在眼压得到有效控制的基础上,这种保护作用更突出。 主题词: 视神经损害/中医药疗法高眼压神经节细胞 凋亡TUNEL