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本文对ISO-DALT进行了优化,建立了适合木本植物叶片蛋白质分析的双向电泳技术体系,实验结果如下: (1)三氯乙酸俩酮制干粉提取法是鹅掌楸叶片蛋白样品处理的较为优化的方法。 (2)确立了一套较为优化的等电聚焦程序,在相对密闭的条件下,可以减少电泳系统对CO2的吸收,同时采用最佳的等电聚焦时间,使阴极漂移的现象大大减弱。 (3)平衡的时间以25-30分钟为佳,测量pH梯度时标样法要优于浸泡法。 从本文的电泳图谱可以发现,ISO-DALT技术体系也能够得到比较稳定的电泳图谱,完全可以达到实验的要求。 利用优化的ISO-DALT技术,对鹅掌楸叶片生长发育过程进行了双向电泳分析,发现: (1)鹅掌楸叶片蛋白质斑点的分子量范围是12.7kD-101.8kD,等电点范围为3.2-7.9,绝大部分斑点主要集中于分子量范围为13.5kD-82kD,等电点范围为3.8-7.0的区域内。大部分蛋白质在叶片不同发育阶段中都稳定表达,有一些蛋白质具有发育阶段表达特异性。 (2)蛋白斑点(56.5kD,pI3.6)和(28kD,pI3.3)在叶片迅速扩展阶段特异出现,这些蛋白质与此发育阶段密切相关。而蛋白斑点(39.9kD,pI5.0)、(39.9kD,pI5.12)、(38.5kD,pI5.0)和(38.5kD,pI5.12)从迅速扩展期到成熟期逐渐消失,且消失过程具有同步性。 (3)5月到6月的成熟期叶片蛋白质变化比较明显,蛋白斑点(53kD,pI5.95)的丰度明显下调,与黄化期蛋白质变化相比较后可以发现,斑点(18.6kD,pI4.73)、(20.1kD,pI5.90)、(13.7kD,pI3.80)、(13.7kD,pI4.09)和(13.7kD,pI4.37)的丰度上调与点(53kD,pI5.95)的丰度下调密切相关,这些蛋白在蛋白质周转中可能起着重要的作用。 (4)蛋白斑点(24.5 kD,pI6.30)为叶片黄化期特异斑点,与该发育阶段密切相关。