神经胶质瘤是中枢神经系统最常见的和致命原发性肿瘤,约占中枢神经系统恶性肿瘤的80%。根据生长速度和对邻近脑组织的浸润程度,胶质瘤可分为低级别(世界卫生组织(WHO)I级和II级),以及高级别(WHO III级和IV级)[3]。即使经过目前最有效的治疗方法如手术、放疗、联合化疗等治疗后,高级别胶质瘤病人的中位生存期仍不容乐观(14.6个月)。这可能是由于胶质瘤的具体特性,如高度浸润性和缺乏明确的边界等引起的。此外,血脑屏障(BBB)的物理和化学约束也是胶质瘤综合治疗的主要障碍。因此,研究恶性胶质瘤形成的分子机制,寻找恶性胶质瘤新的药物靶点是迫切需要的。转录共激活因子TAZ是哺乳动物Hippo通路下游最主要的效应因子之一,包含400个氨基酸,其结构由一个TEAD结合区域(TB),一个WW区域,一个卷曲螺旋结构,一个转录激活区域,以及C端的一个PDZ结合模序组成。TAZ参与其下游靶因子的转录共激活过程,调控细胞的增殖、凋亡以及迁移等多种生理过程。近年来研究发现,在胃癌、非小细胞肺癌、乳腺癌及神经母细胞瘤等多种恶性肿瘤中TAZ的表达均高于正常癌旁组织。肿瘤细胞的恶性增殖往往和细胞周期进程的改变密切相关,EGFR信号通路在此过程中发挥着至关重要的作用。EGFR属于ErbB受体家族,在哺乳动物上皮细胞、成纤维细胞、胶质细胞、角质细胞等细胞表面均有广泛分布,EGFR及其下游信号通路对细胞的生长、增殖和分化等过程至关重要。EGFR一经磷酸化激活,其下游的PI3K/AKT和Ras-ERK通路随即被激活,进而加速细胞周期进程。研究发现,TAZ能够通过促进EGFR配体双调蛋白(AREG)的表达,进而促进乳腺癌细胞MCF10A不依赖于生长因子(EGF)增殖。但是,TAZ对于胶质瘤细胞的增殖的影响的研究还尚未有报道。本文旨在研究转录共激活因子TAZ对胶质瘤细胞增殖的影响及其可能的分子机制,通过实验取得如下结果:1.TAZ对胶质瘤的影响及表达分析我们通过查询数据库及基因芯片检测TAZ与胶质瘤病人预后的关系,及TAZ在不同级别的胶质瘤中的表达情况,结果表明TAZ的表达情况与胶质瘤病人的预后密切相关,胶质瘤级别越高,TAZ的表达量越高。利用Western blot技术检测TAZ在多种不同胶质瘤细胞系中的表达情况,结果显示TAZ在U251、LN229、U87、A172、U118及胶质瘤组织中均有较高的表达。2.TAZ对恶性胶质瘤细胞增殖及肿瘤形成能力的影响采用慢病毒介导的shRNA干扰技术和稳定质粒表达技术在U87和LN229两种胶质瘤细胞系中对TAZ蛋白进行下调和上调,利用MTT、Brdu技术检测两种细胞系的增殖情况,建立荷瘤小鼠模型和利用Soft Agar实验检测TAZ在体内及体外成瘤及自我更新能力的影响。结果显示细胞增殖实验结果表明,细胞的增殖率与TAZ的表达量呈正相关,TAZ下调后细胞的增殖受到抑制,在体内及体外成瘤及自我更新能力也受到相应的抑制,TAZ上调的结果恰好与此相反。3.TAZ对胶质瘤细胞细胞周期的调控利用流式细胞仪检测TAZ对细胞周期的调控,采用Western blot技术检测相应蛋白的表达量结果显示TAZ下调的情况下细胞周期阻滞在G1期,相关周期蛋白CDK2和cyclin E2表达伴随其下调,TAZ上调的结果恰好与此相反。4.TAZ调控恶性胶质瘤细胞增殖的机制研究采用Western blot技术检测EGFR/AKT/ERK信号通路的变化情况,最后利用EGFR信号通路抑制剂阻断由TAZ促进的细胞增殖检测胶质瘤细胞的增殖情况变化,结果显示下调TAZ后相关的EGFR信号通路受到相应的抑制,TAZ上调的结果恰好与此相反,EGFR信号通路抑制剂Eriotinib可以阻断由TAZ过表达引起的相关反应,从而初步确定了TAZ是通过EGFR信号通路调控胶质瘤细胞的增殖与迁移的。