论文部分内容阅读
目的:比较ETS1基因在人乳腺癌组织和癌旁组织中的表达情况及甲基化状态,并探讨表达情况及甲基化状态在患者不同临床病理特征之间的差异,为分析ETS1基因在乳腺癌发生发展中可能的分子生物学机制提供科学依据。材料与方法:（1）以配对设计的方法进行分析研究;于2017年–2018年期间,收集乳腺癌组织、相应癌旁组织36对,并详细记录患者基本信息以及临床病理特征等资料;（2）采用动物组织总RNA提取试剂盒分别提取了18对癌组织及相应癌旁组织的RNA,提取出的RNA用紫外分光光度计定量检测其浓度及吸光度值,并用1%琼脂糖凝胶电泳质检。用实时荧光定量聚合酶链反应分别检测两组ETS1基因mRNA的表达情况;（3）采用全蛋白提取试剂盒分别提取了12对癌组织及相应癌旁组织的蛋白质,用BCA法进行蛋白定量,用Western blot法检测EST1在两种组织中的表达情况;（4）选取12对乳腺癌组织和相应癌旁组织,提取组织DNA,采用基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱分析技术检测组织ETS1基因的甲基化水平;（5）用SPSS 24.0统计软件进行统计学分析,以P<0.05为差异有统计学意义。计量资料采用均数±标准差（?x±s）表示,采用配对t检验和Wilcoxon检验比较两组研究对象在ETS1 mRNA、蛋白表达量和甲基化水平方面存在的差异。PCR数据使用2-△△CT法计算相对表达量;ETS1-mRNA表达水平及甲基化状态在患者病理特征之间的差别采用t检验。结果:（1）ETS1-mRNA在癌组织中的相对表达量（0.97±0.33）较癌旁组织中的相对表达量（0.79±0.10）高,差异有统计学意义（t=2.170,P<0.05）;乳腺癌组织中ETS1-mRNA平均表达水平与患者年龄、临床TNM分期、BMI、绝经状态、临床病理类型、肿瘤直径大小、淋巴结的转移情况、人表皮生长因子受体2（Her-2）状态之间的差异均无统计学意义（P>0.05）;（2）ETS1蛋白在癌组织中的相对表达量（0.82±0.07）高于癌旁组织（0.72±0.08）,差异有统计学意义（t=11.105,P<0.05）;（3）共检测ETS1基因启动子区域在FJ-1、FJ-3及FJ-5片段上的46个CpG位点的甲基化水平;FJ-1、FJ-3两个片段上所有检测位点甲基化水平在两组之间的差异都无统计学意义（均P>0.05）;FJ-5片段上CpG41/42/43位点在癌组织甲基化水平显著低于相应癌旁组织（P<0.05）;而CpG1/2、CpG39、CpG44、CpG45/46/47、CpG48/49、CpG50/51/52、CpG54、CpG55/56/57/58/59、CpG60/61、CpG62、CpG6364、CpG65、CpG67位点在癌组织中的甲基化水平均高于癌旁组织。（4）12例乳腺癌组织中CpG41/42/43位点的甲基化水平在患者年龄、BMI、绝经状态、临床TNM分期、病理类型、肿瘤直径大小、淋巴结的转移情况、人表皮生长因子受体2状态之间的差异均无统计学意义（均P>0.05）。结论:ETS1-mRNA及蛋白在癌组织中的表达显著高于癌旁组织。ETS1基因FJ-5片段CpG41/42/43等位点在乳腺癌组织异常甲基化,提示EST1在乳腺癌中的异常甲基化可能导致ETS1-mRNA及蛋白的过表达,导致其信号转录调节等功能异常,与乳腺癌发生的病理机制有关。