背景与目的CD4+CD25+FoxP3+调节性T细胞(Treg细胞)在维持机体免疫稳态,特别是免疫耐受中具有重要作用,其作用的发挥主要是通过调控CD4+CD25’效应性T细胞(Teff细胞)的功能来实现的。Treg细胞的数量和活性与自身免疫性疾病密切相关,因此如何有效调节Treg细胞数量和活性已经成为研究热点。我们前期研究发现泛素在血液制剂的贮存过程中浓度明显升高,且与保存时间正相关。而泛素受体CXCR4在Treg细胞表面高表达,与Treg细胞的趋化迁移、免疫耐受的诱导以及抗肿瘤免疫作用密切相关,本研究探讨泛素是否通过结合Treg细胞表面受体CXCR4进而影响Treg细胞的免疫抑制活性。方法将正常人外周血的单个核细胞(PBMCs)与不同浓度N末端标记FITC荧光的泛素37℃共孵育1小时,流式细胞仪初步分析泛素与人PBMCs中Treg细胞的结合能力；用磁珠分选的Treg细胞与N末端标记FITC荧光的泛素37℃共孵育1小时,流式细胞仪再次验证胞外泛素与Treg细胞的结合率,并得出两者结合的最适泛素浓度；运用Transwell方法分析不同浓度泛素(0、0.2、0.4、0.6和0.8μM)对人PBMCs中Treg细胞趋化迁移能力的影响；最后胞外泛素对Treg细胞发挥免疫抑制功能的影响通过Treg细胞与Teff细胞共培养后检测：CFSE标记的Teff细胞与Treg细胞按照1：0、1：1、1：2和1：3的比例共培养,37℃培养72小时,流式细胞仪检测Treg细胞对Teff细胞增殖的影响；CFSE标记的Teff细胞与Treg细胞按照1：1的比例共培养,实验组加入最适浓度泛素,对照组不加泛素,37℃孵育72小时,流式细胞仪检测泛素对Treg细胞发挥免疫抑制功能的影响；胞外泛素对人外周血Treg细胞凋亡的作用：Treg细胞与不同浓度泛素(0、0.2、0.4、0.6和0.8μM)置于37℃孵育箱中共培养48小时,收集细胞,加AnnexinV和PI,流式细胞仪检测泛素对Treg细胞凋亡的影响。结果胞外泛素可以与PBMCs中的Treg细胞和磁珠分选Treg细胞结合,结合率分别为1.26±0.11%和17.93±1.81%,95%CI分别为1.00%-1.52%和13.64%-22.23%,两者结合的最适浓度泛素为0.6 μM；泛素可以影响Treg细胞的趋化迁移,当泛素浓度为0.6μM时,该影响作用较明显；Treg细胞可以抑制Teff细胞的增殖,随着共培养体系中Treg细胞比例的增大,其免疫抑制功能增强,胞外泛素可以促进Treg细胞的免疫抑制功能；一定浓度泛素可以抑制Treg细胞的凋亡,浓度为0.6μM时该作用最明显。结论胞外泛素可以与Treg细胞结合,并可进一步影响Treg细胞对Teff细胞的功能调控进而影响其免疫抑制作用的发挥,调节免疫反应。