论文部分内容阅读
目的检测IL-9在健康对照组、VKH活动期患者以及VKH静止期患者血液中的表达,探讨其与VKH的相关性。方法1.采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测VKH活动期患者、VKH静止期患者以及健康对照组PBMCs及CD4+T细胞后上清中IL-9含量。2.实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测VKH活动期患者、VKH静止期患者以及健康对照组外周血单核细胞(PBMCs)中IL-9m RNA表达。3.CCK-8检测不同浓度的重组人白介素9(rh IL-9)对正常人PBMC细胞增殖的影响,确定rh IL-9对细胞适宜的刺激浓度。4.ELISA检测经适宜浓度rh IL-9刺激后的PBMCs、CD4+T细胞上清中白介素17(IL-17)以及γ干扰素(IFN-γ)的含量变化并进行统计学比较。结果1.IL-9在PBMCs培养的上清中,VKH活动期患者表达也显著高于VKH静止期患者(P<0.01)以及健康对照组(P<0.01),VKH静止期患者与健康对照组无显著差异(P=0.27)。IL-9在CD4+T细胞培养的上清中,VKH活动期患者表达同样显著高于VKH静止期患者(P<0.01)以及健康对照组(P<0.01),VKH静止期患者与健康对照组无显著差异(P=0.57)。2.IL-9m RNA在VKH活动期患者PBMCs中的表达显著高于VKH静止期患者(P=0.018)以及健康对照组(P=0.040),VKH静止期患者与健康对照组无显著差异(P=0.777)。3.100ng/ml及以下浓度的rh IL-9刺激健康对照组与VKH活动期患者PBMCs,CCK-8检测细胞增殖情况。100ng/ml rh IL-9刺激后健康对照组(P=0.051);VKH活动期患者(P=0.322)。500ng/ml的rh IL-9刺激PBMCs后,健康对照组(P=0.004);VKH活动期患者(P=0.016),细胞数量显著增多。进一步验证100ng/ml的rh IL-9对PBMCs的增殖作用,健康对照组(P=0.50),VKH活动期患者(P=0.08),VKH静止期患者(P=0.06)。因此,后续实验中选定100ng/ml为rh IL-9的适宜刺激浓度。4.100ng/ml rh IL-9可提高IL-17在VKH患者PBMCs中的表达:VKH活动期患者(P<0.01)、VKH静止期患者(P=0.02);健康对照组(P=0.01)。此外,VKH活动期患者PBMCs上清中IL-17的表达明显高于VKH静止期患者与健康对照组(P<0.01)。100ng/ml rh IL-9同样提高IL-17在VKH患者CD4+T细胞中的表达:VKH活动期患者(P<0.01)、VKH静止期患者(P=0.01);健康对照组(P=0.02)。此外,VKH活动期患者CD4+T细胞上清中IL-17的表达明显高于VKH静止期患者与健康对照组(P<0.01)。100ng/ml rh IL-9对IFN-γ在PBMCs中的表达无明显改变:VKH活动期患者(P=0.40)、VKH静止期患者(P=0.49),健康对照组(P=0.72)。此外,VKH活动期患者PBMCs上清中IFN-γ的表达明显高于VKH静止期患者与健康对照组(P<0.01)。100ng/ml rh IL-9对IFN-γ在CD4+T细胞中的表达同样无明显影响:VKH活动期患者(P=0.63)、VKH静止期患者(P=0.68),健康对照组(P=0.77)。此外,VKH活动期患者CD4+T细胞上清中IFN-γ的表达明显高于VKH静止期患者与健康对照组(P<0.01)。结论实验结果表明IL-9在m RNA与蛋白水平的表达的增高与VKH综合征活动性相关。IL-9可能通过促进IL-17的分泌参与VKH致病过程。