论文部分内容阅读
色素沉着需要复杂的机制来调控。多项研究表明microRNAs(miRNAs)可以参与调控色素沉着,但是机制尚未阐明。外泌体作为细胞间的通讯载体,能够与相邻或远处的细胞进行交流。本研究证实了外泌体携带miRNAs参与角化细胞和黑色素细胞串扰的一种新型调节色素沉着的机制。且运用多种分子生物学技术研究分析了 miR-330-5p对色素沉着的抑制作用,外泌体特异性标志物TSG101在角化细胞和黑色素细胞中的表达与定位,将黑色素细胞与过量表达miR-330-5p的外泌体共培养,检测共培养后黑色素细胞产生黑色素含量的变化,以及靶基因TYR及其相关基因TYRP1、TYRP2和MITF表达量的变化。结果如下:(1)利用qRT-PCR技术和western blotting技术分析黑色素细胞过表达miR-330-5p后,TYR、TYRP1和TYRP2的相对表达量。二项结果均表明miR-330-5p可有效抑制TYR及其相关基因的表达,同时检测黑色素含量,结果显示过表达组黑色素含量降低。(2)利用免疫荧光、qRT-PCR技术和western blotting技术鉴定角化细胞分泌的外泌体。免疫荧光结果显示:TSG101在角化细胞中正常表达;提取角化细胞源外泌体蛋白,western blotting结果显示外泌体特异性标志物TSG101和CD9均呈阳性反应;最后qRT-PCR分析显示角化细胞中过表达miR-330-5p可使外泌体高表达miR-330-5p。(3)通过荧光原位杂交、免疫荧光、qRT-PCR技术和western blotting技术分析角化细胞源外泌体与黑色素细胞之间的相互作用。结果证明过表达miR-330-5p的角化细胞源外泌体可以显著提高黑色素细胞中miR-330-5p的表达水平;过表达miR-330-5p的角化细胞源外泌体可以显著抑制黑色素细胞中TYR的表达和黑色素的合成。本研究结果表明在表皮黑色素单元中角化细胞和黑色素细胞的交流可通过外泌体携带miRNAs来完成。同时,这项研究揭示了外泌体在黑色素细胞色素沉着中的重要作用,为黑色素生成开辟了一条新的途径。