论文部分内容阅读
目的:高质量的生物样本对下游实验的质量至关重要。PAXgene采血管(PAXgene blood RNA tube)目前广泛用于血液RNA样本的保存。目前已有研究表明PAXgene采血管保存全血可以保护RNA免于降解,具有长期稳定性。然而,对于该采血管中的RNA在长期保存后质量的相关研究还较少。为了明确我们中心样本库PAXgene采血管保存的RNA质量,我们对低温保存1个月到7年的PAXgene采血管抽提RNA样本后进行质量控制分析,以期为今后的相关RNA研究提供依据。方法:从东部战区总医院国家肾脏病临床研究中心生物样本库选取300例PAXgene采血管样本,样本在-80℃超低温冰箱保存时间分别为1个月、1年、2年、3年、6年和7年。全自动核酸提取仪和配套的PAXgene血RNA试剂盒提取全血中的RNA。Nano Drop 2000分光光度计检测RNA的产量,并计算A260/280和A260/230的比值,Agilent 2100生物分析仪检测RNA完整性计数(RIN)值。A260/280在1.8~2.2之间和A260/230大于等于1.8,说明RNA纯度高。RIN≥7.0说明RNA完整性较高。结果:保存1个月,1年,2年,3年,6年和7年的RNA中位产量分别为3.46(2.65~4.87)μg,4.34(3.20~5.87)μg,4.77(2.88~6.29)μg,4.19(2.65~6.26)μg,3.85(2.43~6.13)μg和3.21(1.85~6.61)μg。不同保存时间的RNA产量没有显著的差异。保存1个月,1年,2年,3年,6年和7年的样本A260/280分别是2.02±0.04,2.05±0.04,2.05±0.04,2.08±0.03,2.12±0.10和2.11±0.05,A260/280的值都大于等于1.8。但是可以看出保存6年和7年样本的A260/280较其他保存时间有上升趋势(P<0.05)。不同保存时间样本的A260/230的值分别为1.25±0.53,1.38±0.89,1.23±0.47,1.25±0.63,1.26±0.18和1.24±0.32。各比值之间无明显差异。1个月,1年,2年,3年,6年和7年保存时间的中位RIN值分别为8.4(7.6~9.1),8.3(7.7~8.9),8.3(7.8~8.8),8.5(8.3~8.9),7.6(7.1~8.1)和7.9(7.2~8.3)。保存6和7年RNA的RIN值较其他时间点低(P<0.05)。不同保存时间后的RIN≥7.0的比例分别为92%,84%,96%,92%,86%和84%,各比例之间无显著差异。另外,含有血凝块样本的RNA产量和RIN值比没有血凝块的样本都显著降低(P<0.001)。结论:PAXgene采血管中的样本经过超低温保存7年后,提取的RNA产量和质量均较稳定。