第一部分:腭裂胎鼠羊水标志物的筛查及功能分析目的:唇腭裂是口腔颌面部常见的先天性畸形,超声检查为产前诊断唇腭裂的首选方法,但该方法受操作者经验、胎儿体位、羊水量及唇腭裂类型等影响。本研究试图寻找腭裂胎鼠羊水中的特异性标志蛋白,并探索其在腭发育过程中的表达情况,为临床产前诊断腭裂提供帮助。方法:利用全反式维甲酸（all-trans retinoicacid,atRA）和2,3,7,8-四氯二苯二嗯英（2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin,TCDD）构建小鼠腭裂模型,收集正常胎鼠及腭裂胎鼠羊水及胚胎头部。通过蛋白质芯片检测atRA组和正常组胎鼠E16.5羊水中蛋白质表达情况,得到差异表达蛋白。采用ELISA和免疫组化技术进一步检测差异表达蛋白在三组胎鼠羊水及腭组织（E13.5-E16.5）中的表达情况。结果:蛋白质芯片结果显示atRA组胎鼠羊水中有七个差异表达蛋白,其中RAGE,epiregulin,LIF 三个蛋白低表达,而 IL-10,IL-12p40/p70,IFN-β,IFN-y四个蛋白高表达。ELISA结果显示RAGE和epiregulin在atRA组和TCDD组E16.5胎鼠羊水中表达均降低。免疫组化结果显示RAGE在正常组E13.5-E16.5腭组织中均有表达,而atRA组和TCDD组在E14.5-E16.5腭组织中表达的RAGE较正常组显著减少。结论:RAGE和epiregulin是产前诊断腭裂的潜在羊水标志蛋白,RAGE在腭发育和腭裂形成过程中可能发挥作用。第二部分:氯化锂抑制体外培养腭板的融合及成骨分化目的:糖原合酶激酶-3β（Glycogen synthase kinase-3β,Gsk-3β）/β-catenin信号通路在腭发育过程中发挥着重要的调控作用。本实验主要探讨氯化锂（lithium chloride,LiC1）对体外培养腭板的融合及成骨分化的影响。方法:选取CD-1孕鼠E13腭板进行体外培养,将其分成LiC1干预组和对照组。通过HE染色观察腭板融合情况;应用定量PCR和免疫组化方法检测成骨标志物的表达情况;采用Ki-67和TUNEL染色等方法检测腭板中细胞增殖和凋亡情况。利用定量PCR和Western blotting技术检测Gsk-3β在mRNA和蛋白水平表达情况;通过Western blotting分析β-catenin在蛋白水平表达变化。结果:将lOmMLiC1作用于体外培养的腭板,腭板不能正常融合;成骨标志物在mRNA和蛋白水平的表达均较正常组明显降低;腭板类骨质区域Ki-67阳性细胞数目显著性增加;腭中线上皮缝处凋亡细胞明显减少;Gsk-3β在mRNA和蛋白水平的表达均下降;而β-catenin蛋白表达增加。结论:LiCl通过抑制GSK3β的表达来激活β-catenin信号通路,从而抑制腭板融合及成骨分化。这也表明激活经典的Wnt信号通路可能导致腭板不能正常融合。