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1研究背景与目的食管癌(Esophageal cancer,EC)是世界上常见的六大恶性肿瘤之一。河南、河北、山西三省交界太行山地区是中国,也是世界上食管癌发病率和死亡率最高的地区,并以三省交界为中心呈同心圆向外发病率逐渐降低。食管癌主要的流行病学特征是显著的地域性分布差异,高低发区发病率相差高达500倍,提示环境因素可能在食管癌发生中起重要作用。食管癌突出的另一流行病学特征是明显的家族聚集现象,本实验室近年的研究发现:林州食管癌家族史阳性明显高于林州以外河南地区和河南省以外地区,移民流行病学调查发现,林州居民移民到山西长治100年后,食管癌和癌前病变检出率与移出地相似,这些结果提示遗传因素可能在食管癌发生中起重要作用。目前对环境和遗传因素在食管癌发生中的确切分子机制和比重均不清楚。本研究通过大样本量分析不同地区(高/低发区)食管癌遗传倾向(家族史)的分布特征和规律,阐明遗传因素可能在食管癌发生中所占的比重。夫妻两人基因完全不同,如果同时患癌就可认为与他们共似生活的环境、生活方式、饮食习惯、接触致癌物质及病毒细菌的相互传染有关,因此夫妻癌的研究可以用于比较遗传因素和环境因素对食管癌的影响程度,并且十分有利于阐明食管癌关键遗传相关基因的分子机制(候选易感基因)。本实验室在多年的食管癌高发区现场研究中,发现同卵双胞胎(monozygotic twins,MZ)中存在双胞胎之一患食管癌另一正常,或者两人均为食管癌的现象。由于MZ出自同一个受精卵,接受完全一样的染色体和基因物质,因此对比分析双胞胎2个成员的表型及分子变化的不同,有利于阐明环境和遗传因素对肿瘤发生影响程度,将缩小甄别食管癌变关键基因和蛋白的范围。2材料与方法2.1本次共调查食管癌患者25198例,其中男性62%(15502/25198),女性38%(9696/25198),年龄最小17岁,最大93岁,平均58±11。家族史阳性食管癌患者占28%(6990/25198)。均病理检查证实为原发食管鳞癌。调查资料来自河南省安阳、林州、鹤壁、濮阳、新乡、洛阳、三门峡、南阳、信阳、商丘等省内十余家医院,以及河北、四川等省外多家医院,均为已诊断为食管癌的患者资料。2.2夫妻癌共795对,均来自河南省安阳市、林州医院1975-2008年确诊为食管癌的住院病人。2.2 19对同卵双胞胎的食管组织和17对贲门组织均来自河南省食管癌高发区当地居民。36对双胞胎年龄26-67岁,中位年龄43岁。男性双胞胎17对,女性双胞胎19对。取双胞胎胃镜活检组织或手术标本,离体后立即用体积分数85%的乙醇固定,常规组织学处理,石蜡包埋,5μm切片,分别进行HE染色和采用免疫组化ABC方法,分析组织病理结果和p53和PCNA蛋白表达。2.3用SPSS 13.0统计软件对结果进行处理,不同地区食管癌家族史比较采用χ~2检验分析,检验标准取α=0.05。2.4食管癌家族史阳性(EC FH+)诊断标准:连续三代内发生≥2例食管癌(或其它肿瘤)的家庭。食管癌家族史阴性(EC FH+)诊断标准:指连续三代内≤1例食管癌同时也无其他恶性肿瘤患者。2.5食管癌家族史实验共分五组:①太行高发区(太行山脉南段以河南,河北,山西三省交界为中心的食管/贲门癌高发区域)②豫晋冀三省其它高发区(河南,河北,山西三省内,除太行高发区外其它食管/贲门癌高发区域)③豫晋冀三省低发区(河南,河北,山西三省内,食管/贲门癌低发区域)④豫晋冀三省外高发区(河南,河北,山西三省外,其它省食管/贲门癌高发区域)⑤豫晋冀三省外低发区(河南,河北,山西三省外,其它省食管/贲门癌低发区域)2.6夫妻癌共分6组:①夫妻两人均患食管癌②夫妻两人均患贲门癌③夫妻一人患食管癌,一人患贲门癌④夫妻一人患食管癌,一人为其他肿瘤⑤夫妻一人患贲门癌,一人为其他肿瘤⑥夫妻两人均患非食管/贲门癌之外的肿瘤3结果3.1本次共调查食管癌患者25198例,其中男性62%(15502/25198),女性38%(9696/25198),年龄最小17岁,最大93岁,平均58±11。家族史阳性食管癌患者占28%(6990/25198)。在40—50岁食管癌患者组中,太行高发区患者肿瘤家族史阳性为35%(493/1429)也高于三省其它高发区24%(195/798,P＜0.001)和三省低发区20%(184/934,P＜0.001)。在50—60岁食管癌患者组中,太行高发区患者肿瘤家族史阳性为28%(1289/3598)高于三省其它高发区22%(717/3200,P＜0.001)和三省低发区27%(621/2317,P＜0.001)。在60—70岁食管癌患者组中,太行高发区家族史阳性率36%(1047/2950)高于三省其它高发区24%(497/2033)和三省低发区20%(628/3078)P＜0.001。与≥70岁食管癌患者组中类似(40%,30/826vs.28%(226/788);18%,56/1386)P＜0.001)。太行高发区肿瘤家族史阳性食管癌患者中60岁以前各年龄段(＜40,40—50,50—60)发生高于三省其它高发区和三省低发区(2%+15%+39%vs.2%+12%+40%vs.1%+10%+40%)。省外高发区食管癌肿瘤家族史阳性42%(30/72)和省外低发区23%(241/1049)比较,有明显差异,P＜0.001。3.2在本次调查共收集食管癌高发区食管/贲门癌45183例,其中夫妻癌共795对。夫妻癌中婚龄20-30年7%(58/795),30-40年共71%(561/795),40-50年17%(135/795),＞50年5%(41/795),各组间p＜0.05,有统计学差异。夫妻癌患病组,组①共69%(546/795),组②共1%(9/795),组③共13.6%(108/795),组④共13%(105/795),组⑤共3%(24/795),组⑥共0.4%(3/795)各组间p＜0.05,有统计学差异。3.3 19对同卵双胞胎食管组织中,2个成员均为正常组织(NOR)11对,单发不典型增生(DYS)4对,单发食管鳞癌(SCC)3对,双发SCC1对,病理组织一致性为63.16%(12/19)。17对同卵双胞胎贲门组织中,2个成员均为NOR5对,单发DYS12对,病理组织一致率为29.41%(5/17)。食管与贲门组织病理一致率差异无统计学意义(P＞0.05)。在11对食管上皮组织中均为NOR的同卵双胞胎中p53蛋白表达一致4对(36%),不一致7对(64%);PCNA蛋白表达一致10对(91%),不一致1对(8%)。1对双发SCC同卵双胞胎中p53、PCNA蛋白表达均为阳性。5对贲门上皮组织均为NOR的同卵双胞胎p53、PCNA蛋白表达均为阳性。5对贲门上皮组织均为NOR的同卵双胞胎p53蛋白表达均为阴性,PCNA蛋白表达均为阳性,PCNA蛋白表达均为阳性。4结论4.1太行高发区食管癌家族史阳性患者占36%(3348/9326),这个阳性率明显高于豫晋冀其它高发区的26%(1569/6042)和豫晋冀低发区的21%(1802/8709),P＜0.05,提示肿瘤遗传易感性在太行高发区食管癌患者可能起的作用更大些。4.2环境因素在食管癌的发生发展中起重要调节作用。