【摘 要】
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目的了解感染人单核细胞THP-1前后问号钩端螺旋体(简称钩体)外膜蛋白表达变化,为选择钩体基因工程疫苗侯选抗原提供依据。方法采用Triton X-114法提取感染THP-1细胞前后问号
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目的了解感染人单核细胞THP-1前后问号钩端螺旋体(简称钩体)外膜蛋白表达变化,为选择钩体基因工程疫苗侯选抗原提供依据。方法采用Triton X-114法提取感染THP-1细胞前后问号钩体黄疸出血群赖型赖株外膜蛋白。采用双向电泳技术分离钩体外膜蛋白,银染色法检测感染前后钩体外膜蛋白表达差异。感染后4个表达显著上调和4表达显著下调的蛋白点进行胰酶水解后,采用LC-MS/MS方法鉴定蛋白质。应用生物信息学软件分析靶蛋白跨膜区和信号肽,采用实时荧光定量RT-PCR检测感染细胞前后靶基因mRNA变化。采用Western blot检测感染THP-1细胞前后外膜蛋白与相应抗体反应性强弱。结果感染THP-1细胞60min后,钩体外膜蛋白中Loa22、GroEL、F0F1ATP合成酶α和β亚单位表达水平均显著升高(P<0.05),FlaB2、LigB、OmpA家族蛋白和OmpA表达显著下降(P<0.05),实时荧光定量RT-PCR检测结果与之基本一致(P<0.05)。生物信息学分析结果显示,OmpA和OmpA家族蛋白为跨膜蛋白,Loa22、LigB和OmpA家族蛋白含有信号肽。Western blot检测结果显示感染THP-1细胞后钩体OMPs中Loa22与兔抗Loa22血清的反应信号比感染细胞前较强。结论感染细胞时钩体外膜蛋白表达谱可发生明显变化。感染后高表达的外膜蛋白、尤其是GroEL和Loa22可作为钩体基因工程疫苗候选抗原。
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