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青贮饲料是畜牧业中不可缺少的饲料,尤其适用于反刍动物。本研究通过MRS平板划线分离法从天然发酵的青贮饲料中培养分离出优质乳酸菌,结合分子生物学进一步对鉴定出的乳酸菌进行筛选,把筛选出的优质乳酸菌制成青贮添加剂加入到紫花苜蓿青贮中,待青贮发酵完成后测其青贮营养成分、青贮品质、有氧稳定性等指标,分析了单独添加和混合添加不同组合乳酸菌对当地紫花苜蓿发酵品质的影响,为提高贵州地区的牧草青贮品质提供良好的乳酸菌菌种。试验结果如下:(1)本试验从采集的自然青贮饲料中分离得到130株乳酸菌,试验结果全部为乳酸杆菌,根据显微镜观察、革兰氏染色和过氧化氢酶反应鉴定及16S rDNA序列分析,共鉴定出10种菌株,结果如下:同型发酵的鼠李糖乳杆菌Lactobacillus rhamnosus、植物乳杆菌Lactobacillus plantarum、枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis、干酪乳杆菌Lactobacillus casei、香肠乳杆菌Lactobacillus farciminis、嗜酸乳杆菌Lactobacillus acidophilus、副干酪乳杆菌Lactobacillus paracasei;异型发酵的布氏乳杆菌Lactobacillus buchneri、希氏乳杆菌Lactobacillus hilgardii、短乳杆菌Lactobacillus brevis。(2)对所有纯化后的乳酸菌株进行产酸速率测定,研究发现其中Lactobacillus rhamnosus strain BDy3-10能在MRS液体培养基中24 h内将pH值降至4.0以下,产酸速率较快;对所有菌株进行生长速率测定,发现其中Lactobacillus buchneri strain TSy1-3在24 h内将MRS液体培养基在波长为600nm的光密度值升高到3.015,说明其生长较快。(3)将L.rhamnosus strain BDy3-10与L.buchneri strain TSy1-3活化培养后作为乳酸菌添加剂分3组(LR处理组添加L.rhamnosus strain TSy1-3菌液;LB处理组添加L.buchneri strain BDy3-10菌液;LR+LB处理组添加相同含量的L.rhamnosus strain TSy1-3和L.buchneri strain BDy3-10混合菌液)加入当地紫花苜蓿(Medicago sativa)青贮饲料中。结果表明:乳酸菌处理组的粗蛋白(CP)、粗脂肪(EE)、粗纤维(CF)、粗灰分(Ash)含量无明显差异。LB试验组显著降低了青贮紫花苜蓿的中性洗涤纤维(NDF)、酸性洗涤纤维(ADF)含量(P<0.05),可溶性碳水化合物(WSC)含量也比其他处理组高(P<0.05)。(4)与CK组(pH 5.61)相比,LR处理组(pH 5.00)、LB处理组(pH 5.07)、混合菌LR+LB组(pH 5.05)均能够明显降低紫花苜蓿的pH值(P<0.05)。LR处理组在青贮发酵前期的乳酸产生量较LB、LR+LB和CK组高,乙酸含量比LB、LR+LB和CK组低,且所有青贮处理组都没有检测出丁酸。添加L.rhamnosus strain TSy1-3能够显著提升当地紫花苜蓿的青贮发酵品质。(5)LB组青贮的有氧稳定性最长,达到173 h,比对照组延长了52 h,而LR和LR+LB组有氧稳定性也均优于CK组,有氧稳定时间分别为129 h和144 h,比对照组延长了8 h和23 h,添加L.buchneri strain BDy3-10可以提高紫花苜蓿青贮接触空气后的有氧稳定性。综上所述,考虑3种乳酸菌不同添加方式对于紫花苜蓿青贮的影响得出:混合添加L.rhamnosus strain BDy3-10和L.buchneri strain TSy1-3是最佳添加组合。