【摘 要】
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目的:探讨miR-21对小鼠原代肝细胞缺氧/复氧损伤的影响及分子机制研究。方法:运用改良的原位两步胶原酶灌流法提取成年小鼠原代肝细胞,建立肝细胞缺氧/复氧模型,实验分为4组:
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目的:探讨miR-21对小鼠原代肝细胞缺氧/复氧损伤的影响及分子机制研究。方法:运用改良的原位两步胶原酶灌流法提取成年小鼠原代肝细胞,建立肝细胞缺氧/复氧模型,实验分为4组:对照组(正常培养),H/R组(进行H/R处理),空载组(转染空白lip2000后进行H/R处理),miR-21+H/R组(转染agomir-21后进行H/R处理),Real-time PCR检测各组细胞miR-21表达水平,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,Western blot检测PTEN/PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达水平。为进一步探索miR-21对PTEN的调控作用,在细胞缺氧/复氧前转染agomir-21并使用PI3K抑制剂进行处理,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测PTEN/PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达水平。结果:与对照组相比,H/R组、空载组及miR-21+H/R组细胞miR-21表达明显升高,miR-21+H/R组细胞miR-21表达较H/R组及空载组亦升高,miR-21过表达可减少肝细胞凋亡,抑制PTEN蛋白表达,导致Akt磷酸化增加,Bcl-2表达上升,Bcl-2/Bax比值升高,caspase-3表达相对下降。而PI3K抑制剂处理抑制了miR-21过表达所产生的抗凋亡作用,导致细胞凋亡率升高。结论:miR-21可抑制缺氧/复氧导致的肝细胞凋亡,在肝细胞缺氧/复氧过程中起保护作用,这种保护作用可能是通过抑制PTEN/PI3K/Akt信号通路而产生的。
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