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目的:1.研究VEGF质粒直接皮下注射,结合直流电脉冲刺激的基因治疗方案的基因表达情况及其血管生成效应 2.观察其对大鼠随意皮瓣成活的影响 3.对其安全性做初步评价。 方法:构建PCMV-MCS-VEGF-IRES2-EGFP真核表达载体。利用磷酸钙方法转染293细胞。利用直流电脉冲将皮下注射的重组质粒导入缺血皮瓣内。利用荧光显微镜观察GFP标志基因在皮肤的表达情况。利用HE染色及α-actin染色观察VEGF基因的血管生成效应。设计大鼠随意皮瓣模型,观察质粒皮下注射结合直流电脉冲刺激对皮瓣成活的影响。应用ELISA方法观察质粒皮下注射对血液中VEGF浓度的影响。 结果:PCMV-MCS-VEGF-IRES2-EGFP真核表达载体体外成功转染293细胞。皮下直接注射结合直流电脉冲成功将重组质粒导入皮肤。6小时观察到GFP的表达,3天时表达增强,持续14天。基因转染后7天观察到明显的血管增生。质粒皮下直接注射结合直流电脉冲刺激基因治疗方案能够促进大鼠随意皮瓣的成活。不同浓度与剂量的质粒对皮瓣的成活的影响无显著性差异。质粒直接皮下注射结合电脉冲刺激的基因表达局限于局部,对血液VEGF浓度没有影响。 结论:VEGF质粒直接皮下注射结合直流电脉冲刺激能够高效转染大鼠皮肤,具有明显的血管生成效应,能够显著促进大鼠随意皮瓣的成活。在基因能够表达的前提下,提高质粒的浓度及剂量不能进一步提高皮瓣的成活长度。质粒直接皮下注射的基因表达局限于局部,对血液VEGF浓度没有影响。