本试验在参考国外文献的基础上,设计引物,优化反应体系、条件,建立了牛支原体巢式PCR、多重PCR检测方法,应用2种检测方法结合病原学、血清学方法对我国牛支原体感染和发病情况进行了流行病学调查,为我国牛支原体病的检测和流行病学研究提供参考。根据牛支原体的oppD/F基因,设计第2对引物,第1对引物参照国外文献记载,通过优化体系、条件,建立了巢式PCR检测方法:特异性试验证明未扩增出丝状支原体丝状亚种小克隆和无乳支原体条带,只扩增出牛支原体特异性条带;敏感性试验证明扩增DNA最低浓度为10-7μg/mL,敏感性较普通PCR方法提高了103倍;用该方法对28份牛支原体阳性病料进行检测,均扩增出牛支原体特异性片段。根据牛支原体oppD/F基因、丝状支原体丝状亚种小克隆p72基因设计2对特异性引物,无乳支原体引物引自国外文献,建立了可一次性鉴别3种支原体的多重PCR检测方法:特异性试验证明,可同时扩增出3种支原体的特异性片段,在优化体系和条件下证明各模板和引物之间相互不构成干扰,未扩增出猪、鸡支原体模板特异性片段;敏感型试验可检测到模板DNA的含量为0.8μg/mL,多重PCR的敏感性较单一PCR降低了102倍;36份临床样品检测结果显示,多重PCR检测结果与分离鉴定方法一致。对14省市流行病学调查显示,血清学检测结果表明,84.4%的场群存在抗体阳性牛,平均个体阳性率为47.8%,其中肉牛(52%)和奶牛(61.2%)个体阳性率较高,而牦牛个体阳性率(14.2%)较低;从178份组织样品(肺脏、关节液和鼻拭子)中共分离鉴定出18株牛支原体。