研究背景 维生素E(VE)是一组生育酚与生育三烯醇衍生物的总称，是体内具有广泛生理功能的重要脂溶性维生素和天然抗氧化剂，其潜在的肿瘤预防和治疗肿瘤作用受到极大的关注，并以维生素E琥珀酸酯(VES)形式的活性最为广泛，有效。在体内外实验研究中，VES表现出抑制多种肿瘤发生发展的抗瘤特性，但对人类不同类型白血病细胞的作用及其机理研究较少。 从生物学角度出发，肿瘤的发生及其恶性增生与以细胞周期素(cyclins)、细胞周期素依赖性激酶(CDKs)和细胞周期素依赖性激酶抑制因子(CKIs)为核心的细胞周期调控系统的调节紊乱，细胞增殖失控密切相关。细胞周期素依赖性激酶2(CDK2)是目前公认的最重要的细胞周期蛋白之一，VES如何通过CDK2干扰细胞周期，调控肿瘤细胞增殖报道较少。 肿瘤的发生、发展不仅与细胞增殖有关，亦与细胞凋亡相关，Bcl-2/Bax是一对分别抑制和促进细胞凋亡的重要调节蛋白，VES对Bcl-2/Bax蛋白表达相对比率的影响报道较少。 c-Jun氨基末端激酶(JNK)是哺乳动物细胞丝裂原激活蛋白激酶(MAPKs)信号系统的一员，有报道指出JNK信号途径在VES诱导细胞凋亡中发挥重要作用，但未见实验证实。 目的意义 一、明确VES体外对白血病细胞的增殖抑制作用。 二、明确CDK2、Bcl-2/Bax和JNK信号途径在VES阻遏白血病细胞增殖的信号传递网络中的作用，探讨VES阻遏白血病细胞增殖的信号传递网络调控的分子生物学机制。 三、研究结果将有助于揭示VES抗肿瘤作用机制中的一些关键性问题，为VES治疗淋巴细胞白血病的作用机理提供重要依据，也为淋巴细胞白血病的预防和治疗提供新的线索。材料和方法 一、荧光显微镜、细胞计数、PI染色后FCM技术，分别观察VES影响Raji细胞的生长曲线，诱导Raji细胞凋亡的形态学改变，检测细胞凋亡率和细胞周期进程的变化。 二、免疫细胞化学染色检测vES作用后，Raji细胞内CDKZ、Bcl一2和Bax蛋白表达的变化。 三、westem一B10tting方法检测vEs对Raji细胞内用K蛋白活性及表达水平的影响。结果 一、vES和VE体外对Raji细胞的生长均具有程度不一的抑制作用，并表现出时间效应和剂量效应的关系，VES作用48h后，5 pg/ml vEs组的抑制率为28.33%，10协留ml VES组为45.83%，而20 pg/ml VES组则达到了85.83%。用终浓度为20 p g/ml的vEs作用细胞24h，48h，72h后，细胞的抑制率分别为30.16%，85.83%，100%。VES的生长抑制作用明显强于VE。 二、流式细胞仪检测发现，在DNA直方图上Gl峰前出现一个明显的亚二倍体峰(亚Gl峰，即凋亡峰)，并随VES的浓度增加及作用时间增长而增高，具有剂量效应和时间效应关系，VES作用24h后，VES浓度分别为5 pg/ml，10pg/ml，20协创ml的细胞凋亡率为23.9%，32.0%，46.2%。用终浓度为加p g/ml的VEs作用细胞24h，48h，72h后，细胞凋亡率分别为46.2%，68.5%，89.1%，结果表明VE剂量组的细胞凋亡率明显低于同剂量的VES组。 三、流式细胞仪检测显示，啊i细胞经vES作用后，与对照组相比，GO/GI期细胞增多，而S期细胞减少，细胞被阻滞于Gl期。 一3- 四、VES作用后，细胞内CDKZ蛋白、Bcl一2蛋白表达下降，Bax蛋白表达增加。 五、vES处理Raji细胞后，磷酸化型JNK蛋白在处理后6h显著增加，12h达到高峰，并持续24h，而非磷酸化型JNK蛋白无显著变化。结论 一、vES体外对Raji细胞具有生长抑制，促进凋亡的作用。 二、VES可通过影响细胞周期调控因子CDKZ蛋白表达，从而阻滞细胞周期的进程，发挥抗肿瘤作用。 三、VES通过影响细胞凋亡相关蛋白Bcl一2旧ax的表达从而促进肿瘤细胞凋亡，可能是其抗肿瘤的途径之一。 四、VES是JNK的激活因子，JNK信号通路的激活在VES影响肿瘤细胞周期调控因子及细胞凋亡相关蛋白表达，继而诱导肿瘤细胞凋亡的过程中发挥重要作用。