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背景:肝细胞肝癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)占全球肿瘤死亡率第三位,其高转移率和高复发率已成为阻碍肝细胞肝癌长期生存率的主要因素。有研究表明,癌基因和抑癌基因调节失衡是造成肝细胞癌的转移和增殖的重要因素[1],然而目前对于肝癌发生发展过程中分子调控的机制尚不明确。张旭照等[2]人认为,HBV编码的HBx蛋白可能是肝细胞肝癌发病的驱动因素之一。潘英方等人[3]则认为,TIPE及CUL4A调节了肝细胞肝癌的发生、侵袭及转移。大量文献报道,WNT/β-catenin信号转导通路在肿瘤的发生机制中起重要作用,而且与各种类型的癌症相关联,包括肝癌、乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌等。目前并没有报道过SIK1与WNT/β-catenin信号转导通路与肿瘤形成有关,因此,本研究旨在于阐明SIK1与WNT信号通路的关系,从而明确SIK1与靶基因(NCo R-SMRT/TBL1-TBLR1)的结合在肝细胞肝癌中的分子生物学机制。目的:本研究首先分析了肝癌患者临床病理学数据与SIK1表达情况的相关性。通过体外细胞生物学和动物学实验来揭示SIK1在肝癌的发生发展、侵袭及转移作用及其机制,最后揭示了SIK1对临床肝癌患者预后的影响,确定了SIK1能作为一个评估肝癌患者预后以及临床治疗肝癌新靶点的决定性地位和诊断提供实验性依据。方法:1.SIK1在肝细胞肝癌组织中的表达变化及其临床意义研究。1.1 SIK1在肝细胞肝癌组织及其相应癌旁组织中的表达差异,收集52对HCC及相应癌旁组织;IHC方法检测SIK1蛋白的表达情况,评价表达强度和范围;计算整体表达水平,统计学分析二者之间SIK1的表达差异。1.2 SIK1表达与临床指标的相关性分析:将肝癌组织中SIK1的表达水平与相关临床指标(如:患者年龄、性别、肿瘤大小、病理分级、临床分期、淋巴血管转移以及预后情况)进行了相关性分析,评价肝癌组织中SIK1表达的临床意义。2.SIK1对肝细胞肝癌体外生长的影响及其分子机制研究。2.1 SIK对肝癌细胞生长的影响:取生长状态良好的MHCC97H和SK-Hep1细胞分别转染SIK1 sh RNA,对照组转染Vector,监测SIK1对肝癌细胞生长增殖的影响。2.2 SIK1对细胞生长及侵袭能力的检测:MHCC97H和SK-Hep1细胞分别转染SIK1 sh RNA,对照转染Vector,48h后细胞划痕实验及琼脂糖集落形成实验,检测SIK1对细胞的生长级侵及影响,同时Western Blot检测与肿瘤相关蛋白的表达情况。3.SIK1对肝细胞肝癌体外转移能力的影响及其分子机制。3.1 SIK1对细胞迁移及侵袭能力的影响:MHCC97H和SK-Hep1细胞分别转染SIK1 sh RNA和Vector,应用Transwell方法检测SIK1对细胞迁移及侵袭能力的影响。3.2 SIK1对EMT相关分子表达的调控作用:进行上述transwell实验的同时,收取细胞总蛋白,Western Blot检测与EMT分子及其相应的转录因子,观察表达情况。结果:1.SIK1通过磷酸化的SMRT正向调节NCo R-HDAC3,磷酸化SMRT与NCo R-HDAC3形成复合物使β-catenin转录活性降低,抑制β-catenin与TCF4/LEF1结合,从而抑制HCC的生长、侵袭及转移。2.当敲除SIK1时,β-catenin的表达含量增加,SIK1可在T1391位点上直接磷酸化SMRT蛋白。磷酸化的SMRT是NCo R/HDAC3与TBL1/TBLR1结合的启动子,并且能抑制β-catenin与TCF4/LEF1的结合,而抑制WNT/β-catenin信号传导通路。然而,T1391位点上的SMRT蛋白可逆转录SIK1,从而促进β-catenin激活。3.Twist1是SIK1/β-catenin下游起决定性因素的基因,Twist1敲低(Twist1KD)可抑制SIK1的表达。而SIK1、Twist1双重敲低的细胞肿瘤生长、侵袭及转移能力比SIK1单纯敲低细胞的生存率低。4.SIK1的活性和表达受Twist1表达的影响。5.SIK1与HCC呈负相关,同时可以预测HCC临床预后。结论:结果显示SIK1是抑癌基因,它可以抑制HCC的生长、侵袭及转移。SIK1也是肝癌治疗预后显著指标之一,为原发性肝癌的治疗提供新的参考,也为肿瘤化疗提供新的靶点。