目的：　　 凝血因子Ⅻ(FⅫ)，亦称为Hageman因子，是内源性凝血途径的启动因子，属于凝血接触相蛋白。与其他凝血因子缺陷不同，即使是严重的遗传性FⅫ缺乏者，临床上仅有活化部分凝血活酶时间(APTT)延长，而无明显的出血表现。随着分子生物学技术的发展，使得人们对遗传性FⅫ缺陷症患者分子水平的认识更加深入。近年来国内外学者报道了许多FⅫ缺陷的新突变位点，这些突变位点的发现为FⅫ缺陷症患者发病机制的研究提供了分子基础。本文对一个遗传性凝血因子Ⅻ缺陷症家系进行FⅫ表型诊断及DNA分子水平的研究，旨在探讨FⅫ缺陷症的分子发病机制。　　 方法：　　 1、资料　　 先证者，女，67岁，因“急性农药中毒”就诊，常规凝血功能检查发现APTT108.1s/35s，血浆凝血酶原时间(PT)13.2s/12s，凝血因子检查发现FⅫ活性(FⅫ：C)仅为1％，FⅫ抗原(FⅫ：Ag)含量为1.21％；其他凝血因子活性分别为FⅧ:C为300％，FⅨ：C为92％，FⅪ：C为113％。经检查初步诊断为FⅫ缺陷症、急性农药中毒。先证者肝肾功能正常，平素无明显出血症状，无长期服用药物史，询问其家系成员均无出血史。先证者父母非近亲结婚。该家系共8名成员。　　 2、标本的采集、处理和DNA提取　　 在征得先证者及其家系成员知情同意后，采集静脉血，以109mmol/L枸橼酸钠1：9抗凝，4℃3000r/min离心15min，取乏血小板血浆，分装，-70℃保存。用非离心柱型血液基因组DNA提取试剂盒抽提家系所有成员外周血单个核细胞的基因组DNA，-70℃保存待用。　　 3、凝血象检测　　 APTT、PT、FⅧ:C、FⅨ：C、FⅪ:C、FⅫ：C检测试剂采用法国STAGO公司试剂盒，仪器为STA-R血凝仪，均采用一期凝固法检测；FⅫ：Ag检测采用酶联免疫吸附法(ELISA);所有操作步骤均严格按照试剂说明书进行。　　 4、基因分析　　 根据FⅫ基因序列(GenBankAF538691)，应用primer5软件共设计7对引物以覆盖FⅫ基因的所有外显子区域及其侧翼序列。在PCR扩增仪(ABIThermlcycler2720，USA)上进行普通扩增；以及为了减少非特异性扩增条带，7，8和9，10号外显子的扩增均采用touchdownPCR(TDPCR)。PCR产物5μl在1.2％琼脂糖凝胶上电泳，用Goldview标记PCR产物大小。PCR产物进行胶回收纯化(上海桑尼生物科技有限公司胶纯化回收试剂盒)，以制备测序模板，采用Sanger双脱氧链终止法在ABI3730XL测序仪上进行测序，用Chromas软件和DNAMAN软件将测序结果与美国NCBI基因库所公布的FⅫ基因序列(GenBankAF538691)进行比对(Blaster)，寻找突变基因。　　 结果：　　 1、遗传性FⅫ缺陷症家系凝血象检测结果　　 先证者APTT明显延长，为108.1s/35s;先证者二女儿APTT稍延长，为46.2s/35s;家系其他成员APTT在正常参考范围内。先证者FⅫ活性严重减低，为1％，其FⅫ：Ag水平为1.21％，表现为交叉反应物质(CRM)阴性。而该家系其他成员均表现为交叉反应物质(CRM)阳性，即FⅫ：C为低水平，而FⅫ：Ag在正常参考范围内。其中大女儿、二女儿、大外甥女的FⅫ：C分别为22％、15％、16％，FⅫ：Ag分别为115.20％、101.70％、147.50％(通过克隆测序，他们均存在与先证者相同的多态性位点及缺失突变位点)；大儿子、二孙女、小外甥女的FⅫ：C和FⅫ：Ag分别为24％、15％、15％和177.40％、125.40％、128.60(通过DNA分析，他们均存在与先证者相同的46位多态性位点T/T型)。　　 2、遗传性FⅫ缺陷症家系基因分析　　 对该遗传性FⅫ缺陷症家系成员所有14个外显子及侧翼序列进行PCR扩增，纯化扩增产物后，进行测序，结果发现，先证者、其大儿子、大女儿、二女儿、二孙女、大外甥女和小外甥女的启动子区46位多态性均为46T/T型，仅小孙女的该位点多态性表现为46C/T型。另外，通过克隆测序发现先证者、大女儿、二女儿、大外甥女于9号外显子均存在6800-6808delAGCTGGGAG，排除基因多态性，该缺失尚未见国内外报道。　　 结论：　　 1、该家系大部分成员存在最为常见引起FⅫ：C下降的46T/T型多态性位点。　　 2、先证者、大女儿、二女儿、大外甥女于9号外显子6800-6808delAGCTGGGAG，该缺失位点尚未见国内外报道。　　 3、9号外显子6800-6808delAGCTGGGAG与FⅫ活性水平无密切相关。　　 4、该先证者可能还存在其他暂未被发现的突变位点，或蛋白表达缺陷等，有待进一步研究探讨。