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背景：乳腺癌发生的危险和癌形成的生物学特性与人类遗传背景及基因组中肿瘤相关基因的遗传变异有关。单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms, SNPs)是基因组多态性的主要形式,研究证实,多种基因的SNP基因型与乳腺癌发生和发展的危险密切关联。鉴定与乳腺癌相关的SNP位点及其基因型分布,有助于乳腺癌发生和发展危险人群的筛查,从而为乳腺癌的预防和个体化治疗提供客观依据。国外多中心大样本研究结果显示TGFβ1rs1982073(LeulOPro)和FGFR2rs1219648位点多态性与欧美人群乳腺癌发病危险密切相关,但与中国人群乳腺癌发生和发展的相关性研究尚未见报道。乳腺癌是全身性疾病,转移是导致乳腺癌患者死亡的主要原因,但常规病理学和影像学诊断不能检出淋巴结和血行播散的微小转移。定量检测乳腺癌患者血行播散的肿瘤细胞,以及准确判断腋窝淋巴结的转移状态,可以早期发现转移的高危患者,提高临床分期的准确性,从而指导临床实施有效的个体化治疗,提高患者的生存率。目的：研究TGFβ1rs1982073和FGFR2rs1219648位点多态性与中国人群乳腺癌发生和发展的关系,分析其用于乳腺癌发生和进展危险人群筛查的价值。以细胞角蛋白19(cytokeratin-19, CK19)和癌胚抗原(carcinoembryonic antigen, CEA) mRNA作为基因标志,建立检测乳腺癌微转移的定量RT-PCR (real-time quantitative reverse transcription-PCR, QRT-PCR)方法,探讨其监测外周血肿瘤细胞播散程度和淋巴结隐匿微转移状态的临床诊断价值。方法：采用TaqMan等位基因鉴别分析方法检测534例浸润性乳腺癌和410例健康对照人群SNP位点rs1982073和rs1219648的基因型分布频率。采用QRT-PCR方法,检测102名正常献血员和189例乳腺癌患者外周血有核细胞的CK19和CEA mRNA水平,以及57例乳腺癌患者的常规病理诊断阴性的129个淋巴结组织中CK19和CEA mRNA水平。统计学分析采用SPSS13.0软件进行,基因型频率在乳腺癌组和健康对照组的分布比较采用χ2检验,与乳腺癌发生与发展危险的关系评价采用非条件logistic回归分析,以基因型特异性风险比(odds ratios, OR)及95%置信区间(confidence intervals, CI)来表示；CK19和CEA mRNA水平的组间比较采用非参数秩和检验,阳性率的组间比较采用χ2检验或Fisher精确概率法,CK19和CEA mRNA检测结果相关性分析采用Spearman等级相关。结果：1.SNP检测结果：rs1982073和rs1219648各基因型在乳腺癌组分布频率与正常对照组比较均无统计学差异；rs1982073位点携带C等位基因(基因型T/C和C/C)的患者乳腺癌呈高恶性度(组织学分级为Ⅲ级)的风险高于基因型T/T的患者,风险比为4.010(95%CI：1.635-9.839,P=0.002)；对于rs1219648位点,携带G等位基因(基因型为A/G和G/G)的乳腺癌患者发生腋窝淋巴结转移的风险较基因型A/A的患者高,其风险比为1.606(95%CI：1.053-2.448,P=0.028)。2.微转移检测结果：正常对照组和乳腺癌患者外周血CK19mRNA的中位数分别为67和593拷贝/ml血；CEA mRNA的中位数分别为7和14拷贝/ml血,两组比较,CK19和CEA mRNA平均水平差异均具有显著性(P=0.000)；分别以正常对照组CK19和CEA mRNA的最大值497和19拷贝/ml血作为阳性阈值,乳腺癌患者CK19和CEA mRNA阳性检出率分别为54.0%和29.6%,与正常对照组比较差异均具有显著性(P=0.000)。乳腺癌患者外周血CK19和CEA mRNA阳性率均与临床分期呈正相关(P=0.037,0.015),其中Ⅳ期乳腺癌患者的CK19和CEA mRNA阳性检出率均高于Ⅰ-Ⅲ期患者(P=0.035,0.003)；PR阴性患者CEA mRNA阳性率(35.6%)高于PR阳性患者(20.6%)(P=0.016)；而CK19和CEA mRNA阳性检出率在患者年龄、肿瘤大小、组织学分级、淋巴结状态、ER状态及Her-2表达等各组间差异无统计学意义(P>0.05)。CK19和CEA mRNA共同阳性与患者年龄、肿瘤大小、临床分期及淋巴结状态均呈正相关(P<0.05)。另外,以CK19或CEA mRNA其中一项阳性即判断为微转移阳性的结果则与临床分期及PR状态相关(P=0.021,0.017)。常规病理诊断淋巴结转移阴性乳腺癌患者中,CK19mRNA阳性病例的检出率为49.1%(8/57),阳性淋巴结检出率为38.7%(50/129)。CEA mRNA阳性病例的检出率为35.1%(20/57),阳性淋巴结检出率为26.3%(34/129)。两个基因标志检测结果具有相关性(r=0.482,P=0.000)。另外,以CK19或CEA mRNA其中一项阳性即判断为微转移阳性的结果与组织学分级呈正相关(P=0.039)。结论：TGFβ1rs1982073和FGFR2rs1219648位点多态性与中国人群乳腺癌的发病危险无相关性；rs1982073位点C等位基因携带者及rs1219648位点G等位基因携带者患高恶性度乳腺癌的风险较高。两个位点基因型的检测有助于筛查乳腺癌患者中预后差的人群。QRT-PCR方法定量检测CK19和CEA mRNA水平可用于监测乳腺癌患者肿瘤细胞的血行播散程度和腋窝淋巴结的隐匿微转移,尤其以二者联合检测能更准确判断肿瘤的进展程度,并有望成为有价值的预后预测及治疗疗效动态监测的基因诊断方法。