应用血清蛋白质组技术筛选鼻咽癌相关性抗原

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鼻咽癌是东南亚及我国南方几省常见的肿瘤,由于其临床症状不明显,鼻咽癌的早期诊断仍然比较困难。为了寻找新的鼻咽癌诊断标志物,我们采用血清蛋白质组学方法,对可以引起鼻咽癌患者体内发生体液免疫反应的肿瘤相关性抗原进行了筛选。首先,用二维电泳技术一次性分离了鼻咽癌组织中上千个蛋白质点,然后,将这些蛋白质点转移到聚偏二氟乙烯(PVDF)膜上,再分别与鼻咽癌患者自身血清及正常对照血清进行Western blot反应,寻找那些与多数鼻咽癌患者血清发生抗原一抗体反应,而没有或很少与对照血清发生抗原一抗体反应的蛋白质点进行质谱鉴定。在研究中,我们鉴定了13个这样的蛋白质,它们至少在21[%]的鼻咽癌患者血清中存在相应抗体。其中,抗角蛋白19(CKl9)的抗体在47.4[%]的患者血清中能检测到,但却没有在一例对照血清中检测到。随后,我们用免疫沉淀与 Westernblot反应相结合的方法,将鼻咽部低分化鳞癌细胞株CNE2中CKl9沉淀下来,以CKl9作为抗原,对另外30例鼻咽癌患者血清,23例其他肿瘤患者血清及20例正常血清中CKl9抗体的存在情况进行了研究,结果在13例鼻咽癌患者血清、1例其他肿瘤患者血清和1例正常血清中检测到了抗原一抗体反应,这说明抗CKl9抗体具有鼻咽癌特异性。为了初步探讨CKl9诱导鼻咽癌患者发生体液免疫的原因,我们用免疫组化和Western blot反应检测了CKl9在鼻咽癌组织与鼻咽部正常粘膜上皮组织中的表达情况,发现与鼻咽部正常粘膜上皮组织相比,CKl9在鼻咽癌组织中表达明显升高。我们推测过表达可能是CKl9引起鼻咽癌患者体内发生体液免疫反应的原因之一。除了CKl9外,我们对另外两个分别在36.8%和47.4%的鼻咽癌患者血清中存在相应抗体的蛋白质Rho—GDI和EBPl的表达水平也进行了检测,发现Rho-GDI在鼻咽癌组织和鼻咽部正常粘膜上皮组织中的表达没有差别,而EBPl则在65%的鼻咽癌组织中检测到表达升高。本研究筛选到了CKl9等13个能够较特异地引起鼻咽癌患者体内发生体液免疫反应的肿瘤相关性抗原,为鼻咽癌早期诊断、预后检测及免疫治疗的研究提供了新的靶标。
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