【摘 要】
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糖尿病是一种常见的慢性代谢疾病,随着人们生活水平的提高和生活方式的改变,糖尿病患者数量急剧增加。α-葡萄糖苷酶抑制剂作为治疗Ⅱ型糖尿病的一线口服降糖药物受到广泛关注,应用于临床上的药物阿卡波糖等都具有一些副作用,因此寻找新的安全、有效的新型天然α-葡萄糖苷酶抑制剂成为微生物资源研究的重要任务之一。本研究应用PDA、NA、高氏一号3种培养基,从19种具有调节血糖作用的药用植物材料中,分离得到植物内生
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糖尿病是一种常见的慢性代谢疾病,随着人们生活水平的提高和生活方式的改变,糖尿病患者数量急剧增加。α-葡萄糖苷酶抑制剂作为治疗Ⅱ型糖尿病的一线口服降糖药物受到广泛关注,应用于临床上的药物阿卡波糖等都具有一些副作用,因此寻找新的安全、有效的新型天然α-葡萄糖苷酶抑制剂成为微生物资源研究的重要任务之一。本研究应用PDA、NA、高氏一号3种培养基,从19种具有调节血糖作用的药用植物材料中,分离得到植物内生菌530株,为α-葡萄糖苷酶抑制剂产生菌的筛选提供菌种来源。建立了以PNPG为底物的α-葡萄糖苷酶抑制剂筛选模型:在96孔酶标板中加入0.1mol/L磷酸盐缓冲液80μL,鼠肠α-葡萄糖苷酶粗提物80μL（蛋白浓度为3.61 mg/m L）,待测样品25μL（溶于50%DMSO）,混匀后放入37℃恒温培养箱中孵育15 min,同时孵育底物PNPG,加入PNPG 15μL,浓度为20 mmol/L,混匀后37℃恒温培养箱中反应30 min,最后加入100μL 1 mol/L的Na2CO3溶液终止反应,测OD405nm值。应用建立的筛选模型并以阿卡波糖为阳性对照,首先对分离得到的130株植物内生放线菌进行具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的菌株筛选,结果筛选到α-葡萄糖苷酶抑制活性大于50%的菌株22株,其中菌株193403的抑制率为92%,可作为进一步研究的对象。本研究进一步对22株活性菌株进行了16S r DNA序列系统发育分析,其中有17株属于链霉菌属（Streptomyces）,3株归属于小单孢菌属（Micromonospora）,1株归属于拟诺卡氏菌属（Nocardiopsis）,1株归属于诺卡氏菌属（Nocardia）。对菌株193403发酵产物进行了分离纯化,从水相中分离得到组份Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ,其中组份Ⅰ和组份Ⅲ的α-葡萄糖苷酶抑制剂活性较高,分别为99.63%和99.53%,应对其进行进一步的分离纯化,以获得具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的化合物。从乙酸乙酯相中分离得到较纯的组份A,其α-葡萄糖苷酶抑制率为58.23%,进一步经过~1H-NMR,13C-NMR,HMBC,HSQC和高分辨ESI质谱分析,确定其为4-硫代-2?-脱氧尿苷（4-thio-2?-deoxyuridine）。
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