油茶几个关键PcG基因的克隆及其表达分析

来源 :安徽农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:silent_snake
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
油茶是我国南方重要的木本油料树种。它与油橄榄、油棕和椰子并称为“世界四大木本食用油料树种”。种子是油茶油脂来源的主要渠道,但并非唯一的。本研究利用体细胞胚的发育能够诱导油脂生物合成相关基因的表达的原理出发,拟通过对胚性基因有抑制作用的PcG基因的RNA沉默来达到提高油茶愈伤组织含油率的目的。为此,本研究首先对油茶愈伤组织的培养和愈伤组织材料的来源,如芽增殖体系等方面进行了优化。然后以茶树的同源基因为模板,克隆出了油茶几个关键的PcG基因的3`端序列。进而以所得序列信息为基础,设计了双链RNA发卡结构转化农杆菌LBA4404,并以油茶PDS发夹结构的LBA4404转化子的工程菌进行了叶片侵染,为进行PcG基因的RNA干扰实验奠定了基础。共获得了如下研究成果:1.油茶优良无性系叶片的组织培养研究。通过研究得出:1.0mg/LAgNO3、1000mg/L水解络蛋白、100mg/L谷氨酸、0.1mM腐胺等能够快速、高效的诱导出愈伤组织;1/2MS+2%蔗糖+0.7%琼脂+0.5mg/L TDZ+1.0mg/L IBA+1.0mg/L6-BA+1.0mM GSSG/0.1mM亚精胺的培养基配方可以分化出丛生芽;1/2MS+1.0mg/L6-BA+0.05mg/L NAA为芽增殖的最优组合配方。2.克隆油茶PcG基因PRC1与PRC2两复合物各组分亚基CLF、PKL、EMF2基因的3`端片段。其中,获得了油茶EMF2基因的全长cDNA,命名为CoEMF2。该基因阅读框为1866bp,编码621个氨基酸。其蛋白分子量为70.54kD,是不稳定的疏水性蛋白;卷曲螺旋预测结果表明,CoEMF2蛋白中可能存在8个较为明显的螺旋结构;亚细胞定位表明CoEMF2位于细胞核中;还发现CoEMF2中含有两个保守区:VEFS-Box结构域和C2H2型锌指蛋白。3.油茶PcG基因的RNA干扰研究。利用Gateway技术,以pJawohl8-RNAi载体分别构建了油茶CLF、PKL、EMF2以及模式基因PDS的RNA干扰载体;以冻融法导入进农杆菌LBA4404中,通过测序和特异引物的PCR验证了这些重组载体和转化子的正确性。4.通过对油茶嫩叶的侵染,初步证明油茶转基因研究是可行的。选择适当的天气,以含有PDS发夹结构的LBA4404侵染油茶带有部分伤口的嫩梢/叶,出现了PDS被沉默后特有的漂泊症状。5.对几个关键PcG基因在不同组织中的定量PCR进行分析,发现愈伤组织中胚性基因的抑制性染色质标记H3K27me3的标记(CLF)和维持(LHP1)基因都维持在较低水平,但PKL的水平依然较高,因此今后攻克油茶体细胞胚的技术关键可能是PKL的生理效应的抑制方面。
其他文献
居住是每个人的基本需求。随着经济的发展,生活水平的提高,居住环境建设受到越来越多的关注。随着生活工作压力的不断增大,环境污染日益严重,人们对自然的渴求更加强烈。人们希望
海滨雀稗(PaspalumvaginatumSw.)是禾本科(Gramineae)黍族(Paniceae)雀稗属(Paspalum)的多年生草本植物,具有较强的耐盐能力,较高的耐干旱、耐涝、耐贫瘠、耐荫性和耐磨损性。
一年生早熟禾作为冷季型草坪草,目前对其研究集中在草坪管理方面,其他方面的研究比较少,其用途尚待开发。长江以南地区夏季高温炎热,严重影响冷季型草坪草的正常生长,因此,研
省沽油为稀有的木本油料树种,同时又是十分优良的观花观果植物,本研究以安徽省庐江县、石台县、肥西县的省沽油人工栽植林为对象,对省沽油的园林观赏特性、无性繁殖以及整形
“2013王府井时尚生活SHOW”于9月21日在北京王府井步行街正式启动。此次活动由北京市东城区政府王府井地区建设管理办公室和时尚传媒集团联手打造,是国际化时尚与本土文化结
为了明确寄主专化性是否会影响棉蚜的繁殖策略或生活史对策,采用低温和短光照组合(18℃,L∶D=8∶16)分别对棉花型和瓜型棉蚜进行有性世代的诱导,比较两寄主专化型棉蚜产生有
本文介绍了智能仪器仪表中单片机的抗干扰措施,具体说明了硬件抗干扰措施和软件抗干扰措施。 This article introduces the anti-jamming measures of the SCM in the intell
谁在卖空?卖空(Selling Short),就是卖主为了从后来的证券价格下跌中获取利润而卖出其并未持有但允诺将向其他人交付其所借入的证券的行为。与此相反,卖多(Selling Long),就
本文以在国际竹藤网络中心安徽太平试验基地内的紫竹(Phyllostachysnigra)为材料,选择高度为15~30cm的新笋,采用不同浓度矮壮素(CCC、Chlorocholinechloride)、多效唑(PP333,
森林枯落物作为森林土壤层的重要组成部分,具有涵养水源、阻延地表径流等水文生态功能。以往的研究多数重点关注枯落物层的持水蓄水能力,无法真正模拟枯落物层在森林坡面的水文