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DNA作为遗传物质是生命活动中最重要的组成部分,但易受到损伤进而对细胞乃至机体造成损害。DNA损伤中以氧化损伤为主要类型。当机体氧化与抗氧化体系失衡就会出现氧化应激,产生极为活泼的自由基且易导致细胞损伤,从而诱使疾病和衰老的发生。而DNA是自由基特别是活性氧自由基攻击的重要靶分子之一,于是探讨灵敏的检测DNA氧化损伤的方法显得尤为重要。鉴于DNA的结构直接决定了其检测的复杂和难度,因此针对DNA氧化损伤标记物的检测就成为间接检测DNA氧化损伤程度的有效手段。而在被报道的大约20种DNA氧化损伤标志物中,8-OH-dG因易于检出等原因,被一致认为是DNA氧化损伤的重要的标志物之一。另外在分离检测方法中,异军突起的毛细管电泳成为分析化学领域一种新型的分离分析技术。它的快速和高效使得它迅速在食品、药物、法医、环境、生命科学等各个领域独树一帜。本研究致力于优化毛细管电泳法检测8-OH-dG的条件,在此基础上检测氧化胁迫及不同天然产物保护后细胞8-OH-dG含量,而达到检测细胞中8-OH-dG含量,进而反应出抗氧化剂的活性,建立一种新型检测抗氧化剂活性的有效办法。结果如下:(1)探索毛细管电泳检测8-OH-dG标准样品优化条件,结果如下:温度20℃;电压20KV;进样方式压力进样;20psi(Pounds per square inch);进样时间20s;检测时间10min;电泳缓冲溶液为pH 9.0,10mmol/L硼酸-氢氧化钠缓冲液;样品溶剂为三蒸水。同时检测了其精确度和稳定性,误差小重复性好。(2)探索毛细管电泳检测HL-60细胞中8-OH-dG检测优化条件同标准品检测。优化了去除DNA水解酶的关键步骤,采用沸水浴5min使DNA水解酶变性,离心后达到完全沉淀已变性的蛋白的目的。不同浓度H2O2处理细胞后发现随着H2O2浓度增加,8-OH-dG含量越高,说明对DNA的氧化损伤就越大。(3)毛细管电泳检测不同抗氧化剂对HL-60细胞的保护作用,结果显示:番茄红素、槲皮素以及姜黄素均对H2O2引起的HL-60细胞中DNA的损伤有保护作用,且保护作用依次递增,其8-OH-dG的含量由为保护时的312μmol/L分别降至252μmol/L、225μmol/L以及176μmol/L。(4)以鱼藤酮处理U87细胞建细胞DNA损伤模型。毛细管电泳法检测细胞中8-OH-dG含量,未处理时为139μmol/L,鱼藤酮处理后增至270μmol/L,结果显示鱼藤酮对U87细胞造成明显损伤。但经不同抗氧化剂处理细胞后检测,结果显示,姜黄素和槲皮素对鱼藤酮造成的损伤具有极好的保护效果,8-OH-dG含量分别降至174μmol/L和186μmol/L,数据说明姜黄素的保护效果略高于槲皮素的效果。