论文部分内容阅读
阿尔茨海默氏病(AD)是多发于老年人的一种中枢神经系统退行性疾病,也是最常见的一种老年性痴呆。
本课题组利用多重肽抗原技术合成MAPs-Aβ1-15肽,配伍Th2型佐剂MF59,制备成Aβ1-15肽疫苗,免疫接种成年恒河猴,观察其体液和细胞免疫学效应以及安全性,为Aβ1-15肽疫苗的临床应用提供科学的实验依据。
材料和方法1疫苗的制备及接种采用Fmoc固相合成方法合成Cys-Aβ1-15和七聚赖氨酸,经高效液相色谱(HPLC)纯化到95%以上。通过交联剂MBS将Cys-Aβ1-15和七聚赖氨酸耦联,制成MAP-Aβ1-15,再经HPLC纯化到95%以上,进一步经质谱仪分析鉴定后收集分装。佐剂MF59用Squalene、Tween80、Span85和双蒸水按5:0.5:0.5:94(V:V)比例配制。用灭菌的0.01mol/LPBS(pH7.4)稀释MAP-Aβ1-15和Aβ42,接种前将MAP-Aβ1-15、Aβ42与MF59按1:1(v:v)的比例混合,用旋涡振荡器混匀至乳化成功,即为接种用疫苗,MAP-Aβ1-15、Aβ42终浓度分别为200g/L。
健康雄性恒河猴10只,年龄5~8岁,体重6.5~10kg,随机分为2组:Aβ1-15组和Aβ42组,每组各5只。于恒河猴的三角肌内注射接种疫苗,每次每侧各0.5mL。分别在第0、2、6、10、14、18、22、58周进行疫苗接种,共免疫接种8次。2Aβ1-15肽疫苗接种成年恒河猴的体液免疫效应观察于接种疫苗前1周采血1次,每次接种疫苗后2周采血1次,24~56周时每4周采血1次。每次采血量均为5mL。间接ELISA法检测恒河猴血清中抗Aβ42抗体的水平;Westernblot方法检测血清抗Aβ42抗体的特异性;免疫组化ABC法观察血清抗Aβ42抗体与AD转基因小鼠脑组织内的老年斑结合情况。