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逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)是一种将RNA反转录和PCR结合起来建立的一种RNA的聚合酶链反应,其优点是快速、简便且敏感性极高。可用于:①分析基因的转录产物以用于检测突变和基因表达的强度;②克隆cDNA及合成cDNA探针、改造cDNA序列等。本课题将RT-PCR方法和巢式PCR方法相结合,用于脆性X综合征(FXS)、血友病A(HA)和Duchenne/Becker肌营养不良症(DMD)患者的基因检测。FXS是一种发病率仅次于先天愚型的遗传性智能低下X连锁隐性遗传病,占X连锁智能低下的40%,95%以上的脆性X综合征患者发病的分子遗传学基础是FMR1基因(CGG)n结构扩展的动态突变,当n＞200时,FMR1基因5’(CGG)n侧CpG岛异常甲基化,使FMR1基因无表达,故检测不到cDNA产物。DMD/BMD是人类常见的致死性X连锁隐性遗传的神经肌肉系统疾病,表现为由于基因突变而导致的骨骼肌无力和小腿腓肠肌假性肥大。因DMD基因约2500kb,从DNA水平检测,最新的MLPA技术只能检测到约65%为缺失,而微小改变只能通过逐个外显子的测序,即使这样仍然有一些病例无法检测到DMD基因的改变,而对只有基因长度0.5%的大约14kb的cDNA进行分析,不仅可以检测到缺失、插入,还可以直接检测到RNA加工的异常,对其余的微小突变,用cDNA进行突变检测也较gDNA易行。HA是由于血浆中凝血因子Ⅷ(FⅧ)缺乏所致的X连锁隐性遗传的凝血缺陷疾病,其中内含子22和内含子1的倒位约占重症血友病A患者基因改变的50%,应用长片段PCR难度较大,通过RT-PCR方法既可以对FⅧ基因的倒位突变进行检测,而且还可对编码区进行微小突变的检测,提高检测效率。同时,随着RT-PCR方法的建立和技术的日益成熟,将有望运用于绒毛和羊水细胞转录本的检测,对产前诊断提供帮助。