【摘 要】
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目的:本研究旨在证实mi R-30a-3p、Wnt2在OA患者软骨细胞中存在异常表达,同时探讨mi R-30a-3p抑制Wnt2影响Wnt/β-catenin信号通路激活,对软骨细胞增殖和凋亡产生的作用与OA疾病的相关性。方法:1.体外培养OA患者的膝关节软骨细胞。2.通过q RT-PCR检测OA软骨细胞中mi R-30a-3p、Wnt2的表达水平;通过蛋白印迹测量Wnt2、IL-6、II型胶原蛋
【基金项目】
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国家自然科学基金（82160432）,题目:circPVT1/miR-125b/cbfβ调控软骨退变影响骨关节炎疾病发展的作用机制研究； 贵州省卫生健康委科技基金项目（gzwkj2021-244）,题目:miR222-3p/ERα靶控核心结合因子-β影响OA疾病发展的研究； 贵州省科技计划项目（黔科合基础-ZK[2022]一般42
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目的:本研究旨在证实mi R-30a-3p、Wnt2在OA患者软骨细胞中存在异常表达,同时探讨mi R-30a-3p抑制Wnt2影响Wnt/β-catenin信号通路激活,对软骨细胞增殖和凋亡产生的作用与OA疾病的相关性。方法:1.体外培养OA患者的膝关节软骨细胞。2.通过q RT-PCR检测OA软骨细胞中mi R-30a-3p、Wnt2的表达水平;通过蛋白印迹测量Wnt2、IL-6、II型胶原蛋白的表达。3.OA软骨细胞转染mi R-30a-3p过表达和抑制物后,分别使用CCK-8实验、流式细胞计数仪观察mi R-30a-3p过表达和抑制后对软骨细胞增殖和凋亡的影响,并测定Wnt2、IL-6、II型胶原蛋白的变化。4.质粒转染和双荧光素酶报告实验用于验证mi R-30a-3p与Wnt2之间的关系。结果:本研究证实,mi R-30a-3p在OA软骨细胞中的表达水平较正常软骨细胞中的表达水平降低（p＜0.01）,而Wnt2的表达水平增高（p＜0.001）。实验结果回示mi R-30a-3p可以直接靶向Wnt2影响OA软骨细胞增殖和凋亡,相互调控关系中表现为mi R-30a-3p抑制Wnt2的表达（p＜0.05）:（1）过表达mi R-30a-3p,CCK-8实验回示软骨细胞增殖活力显著增加（p＜0.001）,减少IL-6的表达（p＜0.05）;（2）抑制mi R-30a-3p后流式细胞仪Annexin V-FITC检测回示OA软骨细胞的晚期凋亡率增加（p＜0.001）;q RT-PCR检测回示OA相关炎症标志物存在异常增高（p＜0.001）。结论:1.对比正常软骨细胞,OA软骨细胞中,mi R-30a-3p的表达下调,而Wnt2表达增高。2.软骨细胞中mi R-30a-3p过表达,使软骨细胞的增殖活力增加并减少软骨细胞凋亡率及炎症标志物的产生。3.软骨细胞中mi R-30a-3p降低,使软骨细胞的增殖活力减弱并增加软骨细胞凋亡率及炎症标志物的表达。4.软骨细胞中mi R-30a-3p可以通过抑制Wnt2表达,从而影响Wnt/β-catenin信号通路激活,调节软骨细胞增殖和凋亡并最终可能参与OA的疾病进程。
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