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枯草芽孢杆菌作为一种广泛应用的益生菌,其活性抗菌产物大多为小分子抗菌脂肽(Lipopeptide)。因抗菌脂肽具有抑菌谱广、热稳定性高、低抗药性、低毒、可降解等优点,所以它是一类绿色、安全、高效的抗生素替代品,又称为脂肽类抗生素。近年来从海洋微生物中不断发现具有应用价值的次级代谢产物,这类物质通常具备陆地微生物代谢产物所没有的独特结构,在抗细菌、抗肿瘤、抗病毒等方面具有良好的应用前景。本研究对一株分离自海参肠道的枯草芽孢杆菌HS-A38所产的脂肽类物质,进行基因检测、成分分析、分离纯化及活性研究。首先利用PCR技术检测出菌株HS-A38基因组含有四种抗菌脂肽基因,分别编码杆菌溶素(Bacilysin)、伊枯草菌素(Iturin)、杆菌霉素(Bacillomycin)和芬荠素(Fengycin)。再通过酸沉淀分离和有机溶剂抽提的方法,从菌株HS-A38发酵液中得到脂肽粗提物LP,产率为1.955 g/L。利用薄层色谱法(TLC)确定该脂肽粗提物中四个组分LP1,LP2,LP3和LP4;采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)的优化条件,对粗提物LP的液相纯化峰回收,分别在保留时间为25～28 min,28～32 min和33～39 min处,获得A,B,(C三组峰团。对三组峰团进行超高效液相与离子阱串联质谱(UPLC-LTQOrbitrap)分析,得出A,B两峰团主要成分为杆菌霉素(Bacillomycin)同系物,C峰团成分复杂,包含杆菌溶素(Bacilysin),芬荠素(Fengycin)和伊枯草菌素(Iturin)。为了分离单组分且具有广谱抑菌能力的杆菌霉素(Bacillomycin),采用制备层析板分离LP1,LP2,LP3和LP4,并进行活性追踪,结果显示组分LP3对四株细菌和一株真菌酵母均有较高抑制能力,尤其对两株海洋致病菌和真菌有明显的抗菌活性。对粗提物LP使用硅胶柱层析,在氯仿甲醇洗脱液7:3的条件下获得纯化组分LP3;应用反相高效液相色谱(RP-HPLC)和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对该组分做进一步纯化和鉴定。分析表明,LP3样品在保留时间25～28 min产生单峰团LP3-1,其纯度为85.24%;经MALDI-TOF-MS分析和数据比对,组分LP3-1中的主要成分为杆菌霉素Bacillomycin D。Bacillomycin D的分离提取为水产行业中细菌,真菌类疾病的防御提供保障。