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目的:阐明紫草素（SKN）联合吉非替尼（GFB）克服耐药的机制,构建基于能量抑制的新型混合胶束紫草素/吉非替尼共递送系统。从穿越黏液/肠上皮细胞双重屏障等方面,阐释其促进口服吸收、提高生物利用度的机制,为克服吉非替尼耐药提供安全有效的新策略。方法:采用CCK-8法考察吉非替尼/紫草素对HCC827/GR细胞活力的影响,并通过联合指数评价两药联用产生的作用类型。应用western blot技术检测PKM2、P-gp、p-EGFR及P-gp的表达,采用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,应用HCC827/GR荷瘤裸鼠模型验证吉非替尼/紫草素在体内克服耐药的疗效。应用改良的超临界逆向蒸发法（ISCRPE）制备SKN/GFB@micelles和SKN/GFB@WGA-micelles,对其理化性质进行表征。考察胶束的胃肠液稳定性和储存稳定性,并对其体外释放行为进行评价。采用Transwell扩散池法评价胶束的黏液穿越作用,通过Caco-2/HT29-MTX-E12共培养细胞模型考察胶束的摄取、摄取机制以及转运情况,并对胶束的口服生物利用度进行评价。通过细胞毒性和细胞凋亡实验,评价胶束体外克服耐药的效果,应用裸鼠移植瘤模型对其体内药效学及口服安全性进行评价。结果:紫草素/吉非替尼联用可以显著降低吉非替尼对HCC827/GR细胞的IC50,联合指数为0.628,表明两药联用具有一定协同效果。紫草素/吉非替尼联用可以下调PKM2、p-EGFR、P-gp、HIF-1α蛋白过表达情况,并诱导细胞凋亡。体内克服耐药实验结果表明,单独给予吉非替尼或紫草素没有明显的抑瘤效果,当紫草素与吉非替尼联用时,抑瘤效果显著。制得的SKN/GFB@micelles和SKN/GFB@WGA-micelles,粒径分别为150.6±2.1和176.2±1.2 nm,PDI分别为0.243±0.020和0.223±0.004,Zeta电位为-29.1±0.5和-21.5±1.5 m V,临界胶束浓度分别为122.47和77.55 mg·L-1,载药量和包封率均较高。透射电镜下两种胶束均呈类球形,可见WGA附着于SKN/GFB@WGA-micelles表面。两种胶束储存14天内稳定性良好,并在人工胃肠液中8 h内保持稳定。体外释放实验表明,两种胶束均呈现一定缓释效果,并在24 h内持续释放。黏液穿越实验表明,WGA促进了胶束的黏液穿透能力。细胞摄取结果显示,与SKN/GFB@micelles相比,SKN/GFB@WGA-micelles可以促进Caco-2/HT29-MTX-E12共培养细胞对胶束的摄取,其机制可能与主动转运、内吞作用以及WGA介导的受体-配体相互作用有关。转运实验研究表明,与SKN/GFB@micelles相比,SKN/GFB@WGA-micelles可以显著提高紫草素和吉非替尼的Papp（AP→BL）。大鼠药代动力学结果显示,两种胶束均可以提高紫草素和吉非替尼的口服生物利用度。与free SKN/GFB相比,SKN/GFB@micelles与SKN/GFB@WGA-micelles中紫草素的相对生物利用度分别为219.53%和313.85%,吉非替尼相对生物利用度分别为271.50%和330.82%。体外药效学研究表明,SKN/GFB@WGA-micelles可以显著降低HCC827/GR的细胞活力并诱导其凋亡,而其对L-02细胞毒性较小。体内药效学评价显示,SKN/GFB@WGA-micelles可以显著抑制肿瘤生长。组织形态学观察提示,SKN/GFB@WGA-micelles对裸鼠的心肝脾肺肾等组织均没有明显毒性作用,对胃肠道组织亦无显著刺激,表明安全性良好。结论:紫草素通过下调PKM2的表达,特异性地抑制HCC827/GR细胞糖酵解途径阻断肺癌细胞P-gp的能量来源,限制其功能,从而实现克服吉非替尼耐药的效果。构建的新型混合胶束紫草素/吉非替尼共递送系统具有良好黏液穿透效果,可以显著增强肠上皮细胞的摄取效率,提高紫草素和吉非替尼的转运能力,促进口服吸收,提高生物利用度,体内外均表现出良好的克服耐药效果,是一种安全有效的新型递药策略。